- норма расхода по бетону и другой поверхности. Сколько нужно на метр квадратный гидроизоляции?
- Расчет расхода битумного праймера на 1 м2 для гидроизоляции: нормы
- Битумный праймер для чего применяется, чем наносить, область и способ применения
- Для чего используется битумный праймер: состав и характеристики материала
- Битумный праймер: что это и из чего состоит
- Важные свойства и плюсы битумных праймеров
- В чем недостатки битумных праймеров
- Какие функции выполняет битумный праймер
- Что можно обрабатывать битумным праймером
- Какими бывают битумные праймеры
- Как правильно использовать праймер
- О расходе праймера на квадратный метр
- Популярные производители битумных праймеров
- В заключение
- характеристик и расход на 1 м2 |
- Адгезионная грунтовка: технические характеристики, свойства, применение
- Оценка стоимости плана потребления в Функциях Azure
- советов по эффективному процессу
- Основные правила проектирования грунтовки
- Используйте правильные инструменты
- Организация — это ключ!
- Используйте возможности совместного использования
- Хороший дизайн праймеров незаменим для хорошего эксперимента, поэтому помните об этом совете во время вашего следующего проекта генетических исследований. Дополнительная информация о дизайне праймеров и функциях библиотеки праймеров в Genome Compiler доступна в нашем руководстве пользователя. Рэйчел Люстбейдер Понимание эффективности КПЦР и почему она превышает 100% Количественная полимеразная цепная реакция (или КПЦР) — это хорошо зарекомендовавший себя метод количественного определения нуклеиновых кислот, который до сих пор считается методом выбора в большинстве областей молекулярной биологии. Хотя существуют различные типы количественной оценки qPCR (абсолютные и относительные), определение эффективности амплификации должно быть среди первых вещей, которые должен сделать при настройке анализа qPCR. Понимание эффективности и способов ее расчета имеет решающее значение для точной интерпретации данных. В идеале количество молекул целевой последовательности должно удваиваться в течение каждого цикла репликации, что соответствует 100% эффективности амплификации. Точно так же, если количество реплицированных молекул меньше, чем в два раза, это связано с низкой эффективностью — ниже 100%. Наиболее частыми причинами более низкой эффективности являются плохой дизайн праймера и неоптимальные концентрации реагентов или условия реакции .Вторичные структуры, такие как димеры и шпильки или неподходящие температуры плавления (Tm), могут влиять на отжиг матрицы праймеров, что приводит к плохой амплификации. Поскольку каждое дополнительное разведение содержит соответственно более низкие исходные количества ДНК, возникают различия между значениями Ct в серийно разведенных образцах (см. Ниже). Различия между значениями Ct для известных стадий разведения выше, чем предполагалось. 10-кратные разведения должны быть разделены на 3,3 цикла, но в этом случае они будут дальше друг от друга. Одним из способов расчета эффективности амплификации является серийное разведение мишени. Как только вы получите их значения Ct, нанесите их на логарифмический масштаб вместе с соответствующими концентрациями. Затем сгенерируйте кривую линейной регрессии по точкам данных и вычислите наклон линии тренда. Наконец, эффективность рассчитывается с использованием уравнения: E = -1 + 10 (-1 / наклон) . Или используйте , этот калькулятор , который сделает всю работу за вас. Убедитесь, что понимаете, что влияет на наклон кривой усиления, иначе это может ввести в заблуждение. Обычно желаемая эффективность амплификации составляет от 90% до 110% . Теоретический максимум 100% указывает на то, что фермент полимераза работает с максимальной производительностью. Как тогда вообще возможен КПД более 100%? Это будет означать, что в каждом цикле кПЦР генерируется более двух копий последовательности, верно? Пипетирование 96- и 384-луночных планшетов может быть очень утомительной и утомительной задачей. Использование таких инструментов для дозирования, как Pipetting Aid PlatR , может значительно улучшить вашу точность, сохраняя при этом спокойствие и расслабленность. Эффективность усиления превышает 100%, как это может быть? Инфографика: Оптимальная эффективность КПЦР Основная причина этого — ингибирование полимеразы . Даже если к смеси реагентов добавить больше шаблона, значения Ct могут не сдвинуться к более ранним циклам. Это сглаживает график КПД, что приводит к более низкому наклону и эффективности усиления более 100%. Ингибиторы фермента полимеразы включают избыточных количества ДНК / РНК или переносимого материала в образце.Общие загрязнители включают гепарин, гемоглобин, полисахариды, хлорофиллы, протеиназу К, ацетат натрия и т. Д.). Различные другие также могут быть перенесены , со стадии выделения ДНК / РНК, например этанол, фенол и SDS. Если в концентрированных образцах присутствуют ингибиторы, требуется больше циклов для преодоления порога обнаружения по сравнению с образцами без ингибиторов. Ингибирование более вероятно в более концентрированных образцах, и один из способов улучшить наклон кривой — разбавить образец.Это хороший способ проверить, действительно ли проблема заключается в торможении. Ингибирование амплификации в концентрированном образце выглядит так. 10-кратные разведения должны быть разделены на 3,3 цикла, но в этом случае концентрированные и разбавленные образцы ближе. Давайте посмотрим на простой пример. При 10-кратном разбавлении образца основная математика говорит нам, что ΔCt между двумя разбавлениями должно быть около 3,3 при 100% эффективности амплификации. Однако, если присутствуют ингибиторы, ΔCt между двумя разведениями образца может снизиться, скажем, до 2.8. Это значение, вероятно, снова приблизится к 3,3 в точке наиболее разбавленного образца, где ингибирование меньше. Поскольку ингибиторы разбавляются вместе с ДНК / РНК , более высокие разведения могут содержать более низкие концентрации, когда больше нет ингибирующего эффекта. Усиление снова работает на полную мощность, и сигнал выходит так, как должен. Следовательно, значения ΔCt между концентрированным и разбавленным образцом меньше прогнозируемого, что приводит к эффективности амплификации выше 100%. Даже если в исходной смеси реагентов присутствует больше матрицы, значения Ct могут не сдвинуться соответствующим образом из-за ингибирования, что сглаживает график эффективности, что приводит к более низкому наклону и эффективности амплификации более 100%. Этого артефакта обычно можно избежать, используя сильно разбавленные образцы. Если происходит ингибирование, концентрированные образцы следует исключить из анализа при расчете эффективности. Точно так же следует исключить большинство разбавленных образцов в случае высокой вариабельности из-за стохастического эффекта. Следовательно, нецелесообразно включать очень концентрированные или очень разбавленные образцы в количественное исследование. Вам трудно оставаться последовательным при дозировании при выполнении нескольких анализов qPCR? Ты не одинок. Мы разработали Pipetting Aid PlatR , чтобы легко решить эти проблемы за вас. Запросите цитату сегодня. Ингибирования можно легко избежать, проанализировав чистоту образцов ДНК / РНК с помощью спектрофотометрических измерений до количественной ПЦР. Чистота измеряется как отношение значений оптической плотности при 260 и 280 нм, которые соответствуют отношению нуклеиновых кислот к другим молекулам.Если оценка чистоты не опускается на выше 1,8 для ДНК или 2,0 для РНК , образцы следует очистить. Точно так же вы можете использовать другой метод подготовки проб. Если дополнительные этапы очистки не решают проблему, с образцом может быть трудно работать. В этом случае было бы хорошо рассмотреть мастер-микс qPCR, который более устойчив к ингибиторам. Другими причинами эффективности более 100% могут быть ошибки пипетирования, активаторов полимеразных ферментов, ингибирование обратной транскриптазой , неточные серии разведений, неспецифические продукты и димеры праймеров при использовании интеркалирующих красителей (следует контролировать для каждой реакции отдельно) .Перед началом следующего анализа количественной ПЦР убедитесь, что ни один из них не вызывает нежелательных сдвигов ваших кривых амплификации. Кратко рассмотрите основы эффективности кПЦР и объясните, почему она может превышать 100%, на видео ниже: Primer3 Primer Design Tool — Unipro UGENE Плагин для разработки праймеров UGENE Primer3 позволяет создавать праймеры. Вы можете предложить праймеры для полимеразной цепной реакции для создания сайтов с тегами последовательностей для гибридного картирования или для амплификации последовательностей для обнаружения однонуклеотидного полиморфизма и для других приложений. Плагин для разработки праймеров Primer3 основан на широко используемом инструменте Primer3 с открытым исходным кодом (разработанный Стивом Розеном и Хелен Скалецки). Его интерфейс аналогичен веб-интерфейсу Primer3, поэтому, если вы использовали версию программы WWW, вам не потребуется много усилий для использования версии UGENE. Настройка параметров конструкции праймера
- Праймеры Спасательные
норма расхода по бетону и другой поверхности. Сколько нужно на метр квадратный гидроизоляции?
Битумный праймер – разновидность стройматериалов на основе чистого битума, который не проявил бы все свои достоинства в полной мере. Чтобы снизить расход битума по объёму и массе (на квадратный метр поверхности) используют присадки, облегчающие его нанесение.
Что стоит учитывать?
Несмотря на то что поставщики битумных смесей допускают применение битумного праймера при минусовой температуре и в условиях сильной жары, потребитель должен следовать некоторым конкретным ограничениям при покрытии битумными смесями разных типов и разновидностей рабочей поверхности. Если этими правилами пренебречь, то уровень качества и срок службы праймерного покрытия значительно сократятся. До начала покрывания составом поверхность и сам материал разогревают, оставив ёмкость с праймером в тёплой комнате.
При покрытии кровельного перекрытия в холод норма расхода праймера возрастёт, а его застывание замедлится. Большинство производителей не советуют покрывать праймером любые поверхности, чья температура опустилась ниже +10. Наилучших свойств по части высыхания и образования надёжной плёнки на поверхности праймер достигает при комнатной температуре.
Если праймерный состав всё же наносится зимой, то поверхность очищается от снега и льда, а также стоит дождаться её полного высушивания на ветру.
При использовании в условиях полностью закрытого помещения в первую очередь обеспечивают стабильный и мощный приток свежего воздуха. Праймер необходимо тщательно взболтать, прежде чем его наносить. При значительной степени густоты состава (концентрированная смесь) в праймерный состав вливают дополнительное количество растворителя, пока смесь не станет более жидкой и однородной.
Работа по покрытию любых поверхностей праймером требует спецодежды, защитных перчаток и очков. Рабочий должен хорошо обезопаситься от попадания состава на кожу и слизистые оболочки. Праймер наносится при помощи кистей или щёток, валиков либо механическими распылителями. От того, каким способом наносится состав, и будет зависеть его удельный расход.
Перед покупкой нужного количества праймерного состава рассчитайте, сколько его потребуется для решения текущего вопроса по отделке помещений и/или крыши.
Данные о составе и норме расхода указываются на банке, бутылке или укупоренном пластиковом ведре, в котором этот стройматериал продаётся. При отсутствии сведений о рекомендуемой толщине покрытия и норме расхода потребитель подсчитает минимально допустимую норму расхода вещества, ниже которой качество покрытия серьёзно пострадает. В праймере содержится 30-70% летучих углеводородных соединений, которые быстро испаряются при комнатной температуре.
Праймер – также клейкое вещество: он позволяет, пока покрытие окончательно не высохло, приклеить, к примеру, рулонную декоративную плёнку из продуктов переработки дерева и пластмассы. Вертикальная поверхность не даст нанести толстый слой праймерного стройматериала: на стене или опоре могут образоваться потёки, эта проблема решаема при помощи многослойного покрытия из гораздо более тонких слоёв. Выливание праймера на стену с последующим его распределением – как это бывает на полу, крыше или площадке – недопустимо.
Расход при нанесении каждого последующего слоя снижается – из-за сглаживания шероховатостей и мелких неровностей. Чем более ровный слой – он приближается к идеально гладкой поверхности – тем меньше стройматериала потребуется, чтобы скрыть все недостатки ваших стен, пола, площадки или перекрытия.
Перед нанесением первого слоя удостоверьтесь, что поверхность, например, бетонное или деревянное покрытие влагоизолированы от нижележащих слоёв, которые могут вбирать в себя влагу. Это легко проверить, положив, к примеру, на черновой пол полиэтиленовую плёнку. Если с нижней её стороны, обращённой к поверхности, образовался влагоконденсат, то эта поверхность не годится для нанесения битумопраймера и схожих с ним жидких материалов, т. к. нанесённый слой вскоре станет отшелушиваться, пропуская через себя всё испаряющуюся влагу.
Если исправить ситуацию с выделением данной поверхностью водяных паров невозможно, то используйте другие составы, слой которых не портится от влаги – и надёжно защитит слой праймера от контакта с ней. Если речь идёт о покрытии бетонного или деревянного чердачного перекрытия, то с него удаляют снег, воду, затем тщательно его просушивают.
При необходимости праймер перемешивают с битумной мастикой, затем добавляют дополнительные органические растворители. Стыковые швы, на которых может значительно понижаться температура, дополнительно утепляют стекловолокном. После нанесения первого слоя праймера на вертикальной поверхности ему дают высохнуть (до суток), затем покрывают вертикальную поверхность во второй раз.
Если инструменты (например, несущий каркас валика) замазаны в процессе работы слоем праймера, то для удаления этих остатков применяют «уайт-спирит».
В случае повышенной пожароопасности не используйте битумные компоненты, включая праймер – они относятся к легко воспламеняющимся и поддерживающим горение реагентам. Большинство растворителей также легко поджигается даже от малейшего язычка пламени. В остальных случаях битумные стройматериалы – удачное решение с невысокими денежными затратами и влагоизолирующими свойствами.
Нормы
Чтобы высохший праймер не скалывался с покрытой поверхности, бетон, цементное или деревянное покрытие не должно выделять влагу. Под праймер наносят битумную мастику. Если поверхность изначально сухая и не доставляет проблем, то можно сразу же нанести слой праймера. Фирма-поставщик указывает рекомендуемый диапазон значений по расходу на квадратный метр – пользователь быстро сориентируется в конкретной ситуации. Дело в том, что битумная грунтовка, без которой высококачественное покрытие невозможно, содержит до 7/10 летучих растворителей и обладает некоторым т. н. процентом усыхания. Расход битумопраймера при этом вычисляется самостоятельно.
Если нанести слишком тонкий слой, то он долго не прослужит. Возможно его растрескивание, выцветание, отшелушивание даже без выделения влаги самой поверхностью. Если же перебрать с количеством – поверхность также может потрескаться: всё, что окажется лишним, попросту отвалится со временем.
Использование горячих составов – мастики и праймера – не даст слою после высыхания и остывания резко осесть: его толщина, объём останутся без заметных изменений, т. к. растворители частично полимеризуются в засыхающем битуме.
Любой праймер предусматривает среднюю норму расхода – примерно 300 г/м2 на холодной поверхности. Некоторые производители, поставляющие битумный праймер в 50-литровых баках, предусматривают, например, покрытие содержимым одного такого бака до 100 м2 поверхностей в доме или нежилой постройке. Для 20-литрового бака это до 40 м2 поверхности. Нетрудно подсчитать, что 1 дм3 (1 л) праймера хватит для покрытия 2 м2 поверхностей – увеличенная норма предусматривает шероховатый бетон, цемент, неотшлифованное дерево или ДСП, где эта величина может увеличиться вдвое.
При обработке фундамента (без стяжки) может потребоваться примерно 3 кг густого вещества на квадратный метр. Для кровельных перекрытий и покрытия эта величина может возрасти до 6 кг/м2. Если требуется изготовить, к примеру, заменитель рубероида (картон и битум, без минеральной подсыпки), то норма расхода снизится до 2 кг/м2. При этом бетонная опора или перекрытие будет более прочным – благодаря высококачественной гидроизоляции. Строганая, отшлифованная древесина может потребовать лишь 300 мл на 1 кв. м. поверхности; столько же требует и второй (а также третий) слои праймерного состава, наносимого на почти любую поверхность.
Пористые поверхности, например, пеноблок без внешней отделки (штукатурка, деревянный настил) потребуют до 6 кг/м2. Дело в том, что любой текучий, сходный с жидким состав легко просачивается сквозь верхние слои пузырьков воздуха, оболочкой которых служит строительная смесь, применяемая в изготовлении пеноблоков. Неровные и пористые поверхности покрываются широкой кистью (какую удастся найти в ближайших строительных супермаркетах). Для гладких – шлифованное дерево, стальные перекрытия – подойдёт валик. Металлические поверхности из-за своей гладкости потребуют всего 200 г (или 200 мл) праймерного состава. Плоская бетонная крыша с присыпкой (включая рубероидное покрытие) может потребовать 900 г или 1 кг на 1 м2.
Расчёт
Подсчитать норму расхода на квадратный метр легко.
- Обмеряются все имеющиеся поверхности.
- Длина каждой умножается на её же ширину.
- Полученные значения складываются.
- Имеющееся количество битумного праймера делится на получившийся результат.
Если общие нормы, указанные на ярлыке ёмкости, далеки от расчётных – потребитель докупает нужное количество праймера. Либо пользователь на начальном этапе работает с тем, что есть – а после окончания имеющегося стройматериала приобретает то количество, которого ему не хватило для прохождения всего этапа работ. Точная цифра расхода битумного праймера позволит рассчитать его количество при покупке, для этого потребуется найти площадь поверхности, для которой будет производиться гидроизоляция, и разделить ее на расход (на каждый квадратный метр). Если праймер ещё не закупался, то общая площадь конкретной поверхности, например, шиферной умножается на средний рекомендуемый норматив в 0,3 кг/м2. К примеру, 30 м2 шиферной крыши потребует 9 кг праймера.
Применение битумного праймера в видео ниже.
youtube.com/embed/Wg48F4Kfrtg?modestbranding=1&start=4&iv_load_policy=3&rel=0″/>
Расчет расхода битумного праймера на 1 м2 для гидроизоляции: нормы
Гидроизоляционные работы часто выполняются с использованием битумного праймера. Чтобы точно знать, сколько материала потребуется приобрести, нужно заранее провести расчеты. Производители указывают средний расход на упаковке своей продукции, однако есть факторы, которые могут изменить трату средства. О том, как правильно посчитать расход праймера на 1 м2 гидроизоляции, будет рассказано далее.
Общее описание
Праймер изготавливается из битума, чтобы размягчить нефтяной битум, его подвергают высокотемпературной обработке, и применяют растворы из органики. В составе не могут присутствовать иные элементы, не используются токсичные разбавители. Проведение гидроизоляции на кровле будет проще, если на основание сначала нанести праймер из битума, качество работы будет лучше.
Чтобы размягчить нефтяной битум, его подвергают высокотемпературной обработке, и применяют растворы из органики.
Разновидности битумного праймера
Чтобы узнать, каким будет праймер битумный расход на 1 м2, следует сначала изучить разновидности, представленных на строительном рынке средств. На рынке имеются концентрированные виды и готовые варианты.
Первый вид требует разведения состава перед использованием разбавителем органического происхождения. Можно выбирать для этой цели бензин, white-spirit или керосин. Пропорция разбавления должна составлять 1 к 2. Подобный вариант удобен, когда нужно сэкономить место при перевозке, а также для хранения, если работы не будут осуществляться еще долгое время.
Готовый праймер может использоваться сразу же, нет необходимости возится с его разбавлением. Следует лишь хорошо перемешать состав до нанесения на материал. Это экономит время, и делает процесс более комфортным.
Готовый праймер может использоваться сразу же, нет необходимости возится с его разбавлением.
Область применения
Когда принято решение провести гидроизоляционные работы данным видом продукта, то знание, сколько средства будет необходимо для процесса обязательно. Тогда ремонт будет проводиться за один раз без отвлечения на докупку не хватающего количества.
Средний расходный показатель равен 0.25-0.35 килограммам на квадратный метр. На него влияют уровень сцепляемости основания и его ровность, присутствие шероховатой структуры увеличит расход.
Праймер из битума может применяться на различных видах покрытий: асбестоцементных, бетонных, металлических, железобетонных, деревянных и пористых. Также допустимо использование продукта для покрытия кровли и гидроизоляции. При последнем виде ремонта может применяться раствор как самостоятельное средство, либо в совокупности с иными гидроизолирующими средствами.
Востребовано применение материалов с основой из битума в качестве гидроизолирующего средства на фундаменте, конструкциях, находящихся под землей, металлическом трубопроводе и стальных трубах. Он обладает свойством антикоррозийной защиты металла, поэтому применяется и с этой целью.
Допустимо использование продукта для покрытия кровли и гидроизоляции.
Как рассчитать необходимое количество
Умение проводить расчеты грунтовки битумной расхода, поможет подготовить необходимо количество средства сразу. Средние показатели прописывают на упаковке конкретного средства, ориентиром служит именно данная цифра. Однако она может стать больше, если нанесение будет проводиться на пористую структуру поверхности, которая будет пропитывать часть материала, и чтобы получить ровную поверхность, потребуется наносить больше средства.
Чтобы получить количество килограммов средства, требуемое для отделки. Первым делом рассчитывают площадь, обрабатываемой поверхности. После полученный результат делится на показатель расхода.
Средние показатели прописывают на упаковке конкретного средства, ориентиром служит именно данная цифра.
Нормы использования
Нормой траты средства на квадратный метр является 250-350г/м2. Однако получить подобный расход, можно, если правильно выполнять принцип работы по покрытию поверхности материалом. Наносится битум на бетон, бетонно-цементные и иные пористые, шероховатые основания.
Когда работать предстоит с неровностями, с порами и пылью, то инструментом следует выбирать щетку или кисти из капронового материала. Их использование позволит получить хорошо пропитанное битумом основание, улучшить уровень фиксации.
Нанесение грунтовочного раствора приведет к более продолжительному сроку эксплуатации изделия. Когда стоят задачи приклеивания материалов в рулонах на железобетон или бетон праймером, то участки швов между блоками должны быть обработаны грунтовочным составом. Каждый новый слой рулонного материала может наклеивать к основанию спустя 4 часа после поклейки предыдущего.
Укладка материалов в рулонах выполняется внахлест, ширина укладки делается в 10 см. Следят, чтобы не произошло перекрестного приклеивания. Когда установка положения полотна завершится, поверхность прокатывается специализированным катком в форме цилиндра.
Укладка материалов в рулонах выполняется внахлест, ширина укладки делается в 10 см.
Нормы расхода битумного праймера по разным поверхностям
Расход зависит и от вида основания, которое будет обрабатываться. Этот фактор является важным при проведении подсчета количества гидроизоляционного средства.
Так при работе с бетонной поверхностью может потребоваться от 250 до 350 грамм на кв.м. Такой же показатель будет при отделке шифера, и заштукатуренной основы.
Нанесение на металл и сталь потребует 200 грамм битумного праймера, деревянные конструкции используют 300-350 гр. Когда обрабатывается старое покрытие крыши из рулонов, то трат будет больше, цифра может достигнуть 0.5 килограмм на квадратный метр.
Самый неэкономный расход будет при обработке кровельного покрытия с присыпкой – 750-900 грамм.
Расход зависит и от вида основания, которое будет обрабатываться.
Расход битумного праймера «Технониколь»
Технониколь марка, которая выбирается многими простыми покупателями, а также профессионалами. Она выпускает большое количество битумных составов, которые могут применяться для разных ситуаций. По этой причине будут рассмотрен расход праймера битумного Технониколь на 1 м2.
Часто готовые смеси продаются с объемом, обозначенным только в литрах. Так литра праймера данной компании хватит, чтобы покрыть 3.3 метра в квадрате. Показатели могут быть несколько иными, повлиять на это может вид материала, который будет обрабатываться.
Работа в труднодоступных участках удобнее будет выполняться с помощью щетки и кисточки из капрона. Для большой площади выбирается валик, он помогает быстро и равномерно распределить битум по поверхности.
Чтобы подготовить поверхность, ее сначала очищают, рекомендуется использовать с этой целью метлу из полипропилена. Чтобы покрытие продержалось длительный период времени и распределилось ровно, требуется ликвидировать старую отделку.
Технониколь выпускает большое количество битумных составов, которые могут применяться для разных ситуаций.
Расчет расхода праймера на 1 м2
Расчет расхода битума производить несложно, необходимо лишь вычислить площадь основания. А также узнать расходный показатель конкретного праймера. Эта информация доступна в интернете. На сайте производителя также часто присутствует онлайн калькулятор, с помощью которого провести вычисления не составит труда.
Расчет расхода битума производить несложно, необходимо лишь вычислить площадь основания.
Битумный праймер надежный продукт, который поможет провести качественную гидроизоляцию различных конструкций. Для проведения ремонтных работ мастера заранее просчитывают количество килограммов, которые необходимо будет приобрести, чтобы покрыть всю площадь. В статье было подробно расписаны правила самостоятельного проведения подсчетов.
Видео: Гидроизоляция фундамента битумным праймером
Битумный праймер для чего применяется, чем наносить, область и способ применения
27. 07.2020В статье мы рассмотрим основные эксплуатационные характеристики этой грунтовочной смеси, поговорим о её назначении и приведём технические данные с описанием физических свойств. Затем будет дана инструкция по применению.
Для чего применяется битумный праймер и что это за материал?
Праймер битумный «СТ № 1» — это холодная смесь битума в органическом растворителе с добавлением ПАВ и антикоррозионных соединений. Битумный праймер применяется для грунтования бетонных, шиферных, цементных поверхностей перед монтажом наплавляемых гидроизоляционных материалов.
Главными свойствами этой грунтовки являются:
- Повышенная адгезия, которая позволяет достигать хорошего сцепления с различными поверхностями.
- Повышенная проникающая способность, что обеспечивает заполнение даже микротрещин и пор обрабатываемого материала. Это способствует укреплению кровельной или иной конструкции (например, фундамента или дорожного покрытия), продлевая срок их службы.
- Быстрое высыхание: нанесённая грунтовка высыхает примерно за 6 часов при температуре 20 С, что удобно при устройстве многослойных кровельных конструкций, так как значительно ускоряет работу.
- Лёгкое нанесение: это готовая смесь, не требующая подогрева перед работой, – её нужно лишь перемешать.
- Экономичность: при работе с этой грунтовочной смесью не требуется дополнительная обработка или использование других грунтовых составов.
- Эластичность, сохраняющаяся даже после высыхания. Это позволяет покрытию не разрушаться при различных механических воздействиях (например, вызываемых усадкой здания) или внешних факторах (подвижках грунта).
- Удобство нанесения: для работы с этой грунтовкой подойдёт любой инструмент от кисти до пульверизатора.
Технические данные, физические характеристики
Перечислим главные физические характеристики материала, напрямую влияющие на эксплуатационные свойства.
- Условная вязкость — от 25 до 35 сек для 200 мл смеси. Эта величина характеризует гидравлическое сопротивление течению, когда заданный объём тестируемого вещества пропускают через трубку стандартного диаметра. Величина условной вязкости битумного праймера (25-35 секунд) означает превосходную текучесть этой смеси, высокую проникающую способность и то, что её легко наносить.
- Доля нелетучих веществ по массе: не менее 48%. Проще говоря, это твёрдые составляющие смеси. 48% означает не слишком большую густоту грунтовки, с ней удобно работать.
- Температура нанесения: от –20 до +40 °C, при этом предварительный нагрев не требуется в теплое время года. Тем не менее при отрицательной температуре воздуха для лучшей адгезии праймера к поверхности рекомендуется предварительная выдержка смеси в отапливаемом помещении и ее нагрев до комнатной температуры.
- Условный предел прочности (номинальное напряжение излома или предел прочности при разрыве) битумного праймера составляет 25 МПа.
- Влагопоглощение в течение 24 часов составляет не более 0,5% по массе. Это означает, что даже в условиях постоянной влажности материал не набухает.
- Термостойкость: праймер не размягчается при температуре вплоть до +75 °C, что позволяет использовать эту грунтовку без ограничений как в средней полосе, так и в южных регионах России.
- Расход праймера битумного на 1 м2 бетонной поверхности — около 0,25 л. Для других материалов этот показатель может отличаться от расхода по бетону, но незначительно.
Советы по нанесению
- Прежде всего необходимо подготовить обрабатываемую поверхность, очистив её от мусора, пыли, а также высушив при необходимости.
- Высокая влажность обрабатываемого покрытия может помешать достаточной адгезии материалов
- Перед нанесением смесь следует хорошенько перемешать, а наносить её на кровельное покрытие или фундамент можно чем угодно: хоть кистью или валиком, хоть пульверизатором – в зависимости от площади покрытия.
- Если работы ведутся зимой, рекомендуется предварительно нагреть смесь на водяной бане до комнатной температуры. Это обеспечит ускоренное проникновение грунтовки и хорошее последующее сцепление рулонной кровельной гидроизоляции с обработанной поверхностью. Не допускается нагревать состав способами, при которых используется открытый огонь или возможны искры.
- После нанесения нужно дождаться, когда праймер высохнет, а затем, если необходимо, можно нанести дополнительный слой (например, при большом количестве трещин на кровельном или другом покрытии, или если поверхность пористая) либо приступить к другим работам.
- Проверить, высохла грунтовка или нет, можно на ощупь (например, по плотности, отсутствию липкости), а также в соответствии с инструкцией, где указано, сколько сохнет праймер битумный. Обычное время высыхания — не более 6 часов.
Советы по безопасности
- При проведении работ нужно соблюдать определённые правила: в частности, не курить и не подносить эмульсию близко к огню.
- Также нельзя работать в непроветриваемом помещении, поскольку летучие соединения, выделяемые праймером, могут оказаться вредными для работников (например, в случае, если они страдают заболеваниями дыхательных путей или аллергией).
- Также следует заботиться о защите слизистой оболочки глаз и стараться, чтобы состав не попадал на кожу. Рекомендуется использовать резиновые перчатки, очки или маску.
- Для сохранения эксплуатационных свойств праймера его нужно хранить только в закрытой упаковке в течение 1 года с момента производства.
Государственный сертификат
Продукт соответствует нормативным документам ГОСТ Р и имеет сертификат соответствия, выданный Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии. Сертификат был выдан на основе лабораторных испытаний, подтвердивших, что все реальные характеристики продукта соответствуют заявленным производителем.
ПРОДУКЦИЯ ПАРТНЕРОВ
Для чего используется битумный праймер: состав и характеристики материала
Грунтовка кровли битумным праймером – обязательный этап ее подготовки при изоляционных работах. На обработанное основание можно укладывать наплавляемые и самоклеящиеся гидроизоляционные материалы. Пропитка улучшает сцепление кровли с гидроизоляцией, что позволяет создать прочное и надежное кровельное покрытие. Иногда праймер используют и в качестве самостоятельного защитного слоя.
Битумный праймер: что это и из чего состоит
Многие путают битумный праймер с мастикой и герметиком. На деле это абсолютно разные смеси со своим составом и назначением. Битумный праймер – это грунтовка в виде водной эмульсии нефтяного битума с добавлением уайт-спирита, керосина и прочих компонентов, которые придают смеси те или иные свойства.
Простыми словами, праймер – не твердый, а жидкий битум. Он представляет собой композицию из смолистых углеводородов, которые относятся к органическим веществам. Для них характерны вязкость и очень темный насыщенный черный цвет. На основе битума изготавливают различные материалы: рубероид, стеклоизол, линокром, ондулин, пергамент и пр.
Будучи жидким битумом, праймер выглядит как черная жидкость, которая не растворяется в воде и абсолютно не пропускает ее. Как и другие виды грунта, праймер используют, чтобы последующие слои конструкции легли более ровно, лучше закрепились и дольше держались.
Обратите внимание: грунтовка – более широкое понятие. Она бывает не только битумной, но и алкидной, фосфатной, акриловой, эпоксидной и шеллаковой.
Нанесение праймера кистью
Важные свойства и плюсы битумных праймеров
Праймеры производят из нефтяных битумов с температурой плавления 75-80 °C. Это позволяет без ограничений использовать состав даже при жаркой погоде.
- Высокая скорость высыхания (в зависимости от типа праймера 1-12 часов), что позволяет за незначительное время подготовить поверхность к отделке.
- Устойчивость к высоким и низким температурам.
- Стопроцентная влаго- и воздухонепроницаемость.
- Высокая проникающая способность (заполняет все поры, технологические трещины или дефекты).
- Готовность к применению (не нужно дополнительно ничего делать, иногда только развести, если раствор концентрированный).
- Стойкость к возникновению коррозии.
- Сохранение эластичности после высыхания, что гарантирует герметичность слоя при землетрясениях или усадке здания (важно для новостроек).
- Хорошая растекаемость и быстрое схватывание, что делает нанесение очень простым, причем для качественной грунтовки достаточно одного слоя.
Распыление битумного праймера
Праймер впитывается глубоко в структуру поверхности, что обеспечивает долговременный эффект. Получаемая поверхность не липкая и не имеет швов, что оптимально для последующей проклейки гидроизоляции.
Обратите внимание: праймеры защищают обработанную поверхность от появления грибков и плесени, что особенно важно для помещений, где повышена влажность.
В чем недостатки битумных праймеров
К минусам таких пропиток относят достаточно резкий запах и токсичность. Но эти недостатки можно не принимать во внимание, если в процессе применения составов работники будут соблюдать технику безопасности. Еще одним минусом праймера считают маркость – его сложно удалить с любых поверхностей. Но сделать это можно, используя:
- Бензол – удаляет битум с тканей.
- Уайт-спирит – устраняет следы битума с инструментом.
- Дизельное топливо – убирает битум с резиновых поверхностей.
Какие функции выполняет битумный праймер
Обработка битумным праймером увеличивает адгезию основания с материалами, которые на него укладывают. В отличие от грунтовки этот состав больше не укрепляет, а склеивает, герметизирует и придает поверхности стойкость к влаге. За счет таких эффектов удается добиться следующего:
- Повысить изоляционные свойства применяемых материалов.
- Ускорить процесс финишной отделки.
- Снизить общие расходы на 1,5-4% и затраты на дальнейшее обслуживание.
- Продлить срок службы обработанных покрытий.
Что можно обрабатывать битумным праймером
Битумный праймер можно наносить на следующие поверхности и конструкции:
- Плоские кровельные покрытия.
- Мостовые пролеты.
- Наружные части металлических трубопроводов.
- Плиты перекрытия и покрытия.
- Бетонные конструкции: фундаменты, цоколь и прочие элементы здания, касающиеся почвы.
- Стены и пол подвальных и полуподвальных помещений.
Пропитка может применяться не только на бетонных поверхностях. Ее разрешается наносить на асбестоцементные, железобетонные, металлические и деревянные конструкции. Поскольку пропитка противостоит коррозии и биологическому воздействию, она защищает трубы от гниения, продлевая срок их службы.
Обратите внимание: в большинстве случаев битумные праймеры для кровли, фундамента и прочих конструкций ничем не отличаются. Это универсальные пропитки, которые подходят для любых материалов, но существуют и специальные составы.
Наклеивание рулонных материалов на праймер
Какими бывают битумные праймеры
Основной критерий классификации битумных праймеров – консистенция. От нее также зависит способ применения пропитки. По этому критерию выделяют:
- Готовые праймеры. С ними не нужно проводить какие-либо манипуляции перед началом работ. Такие пропитки можно сразу наносить на основание. Достаточно только тщательно перемешать содержимое тары.
- Концентрированные. Перед применением обязательно разводятся, например, с помощью солярки, уайт-спирита или бензина.
Кроме универсальных пропиток, подходящих для любых конструкций, существуют битумные праймеры специально для фундамента, кровли, металлических поверхностей, труб, дорожного покрытия и пр. В последнем случае состав используют как связующее, необходимое для закрепления щебня при укладке асфальта. В зависимости от области применения могут отличаться состав и расход битумного праймера на 1 м2.
Праймер или мастика – разница и что выбрать
Многие перед началом гидроизоляционных работ сталкиваются с выбором между праймером и мастикой. Оба состава производятся на основе битума. Совпадает и их назначение – защита кровли и прочих конструкций от влаги. В чем же тогда разница между праймером и мастикой, и какой из составов лучше выбрать?
Рекомендуем изучить подробнее: «Что такое битумная мастика: из чего состоит, свойства и характеристики, преимущества перед рулонными материалами и технология применения».
Однозначно ответить на этот вопрос нельзя. Мастики более вязкие, нежели праймеры. В их состав могут входить пластификаторы и различные виды крошки для придания составу определенной густоты. Если основная задача праймера – создать качественное основание, в которое ни сверху, ни снизу не проникнет влага, то мастика предназначена непосредственно для гидроизоляции.
Таким образом, выбирать среди этих материалов один нерационально. Это два взаимодополняющих друг друга состава. Праймером поверхность обрабатывают до нанесения мастики, чтобы увеличить ее гидроизоляционные свойства. По этой причине опытные строители рекомендуют использовать сразу оба состава. Это улучшит качество работ и оптимизирует затраты на последующее обслуживание конструкции.
Как правильно использовать праймер
Процесс нанесения битумного праймера называют праймированием. Чтобы оно действительно принесло хорошие результаты, обрабатываемую поверхность нужно хорошо подготовить. Она должна быть сухой и чистой, без крупного мусора, грязи и пылевидных частиц.
Важно: ввиду токсичности нефтяных паров праймирование внутри помещений должно происходить обязательно с обеспечением качественной вентиляции. Работники должны иметь защитную экипировку, обязательно перчатки и очки, а иногда даже маску.
Подготовка основания с помощью праймирования
Что касается погодных условий, то здесь ограничений к праймированию практически нет. Пропитку можно использовать при температуре от -50 до +120 °C. Главное, чтобы влажность поверхности не превышала 15%. Для нанесения удобно использовать:
- Валик – особенно актуален для праймирования труднодоступных мест.
- Кисть – рекомендована для небольших поверхностей.
- Краскопульт – автоматизирует процесс праймирования, тем самым ускоряя работы. Удобен для нанесения пропитки на вертикальные поверхности.
Гидроизоляция основания праймированием
Поскольку праймер достаточно жидкий, на вертикальные плоскости наносить его может быть сложно. Но некоторые предприимчивые строители легко решили эту проблему с помощью обычной полиэтиленовой пленки, которую накладывают на только что нанесенный слой пропитки. Обычная пленка удерживает состав на поверхности до высыхания.
Очень важно: битум – это горючее вещество, поэтому при использовании праймера нельзя работать с открытым огнем вплоть до момента, пока состав полностью не высох.
Если праймер используют в качестве клеящего состава, то каждый последующий слой приклеивают спустя 3-4 часа после предыдущего. Для надежного сцепления полотен их прикатывают цилиндрическим катком.
О расходе праймера на квадратный метр
Выбирая битумный праймер по расходу на м2, важно знать, что этот параметр зависит от конкретной пропитки и основания, на которую ее наносят. В любом случае расход необходимо смотреть на таре – здесь производитель указывает всю необходимую информацию.
Важно: на обработку одной и той же поверхности готового праймера потребуется больше, чем концентрированного, поскольку последний разбавляют растворителем.
Расход битумного праймера на 1 м2 определяется пористостью основания. В качестве примеров можно привести самые распространенные поверхности, подвергаемые праймированию:
- Металлические – в среднем уходит 200 г/м2.
- Штукатурка, шифер – 250-300 г/м2.
- Конструкции из древесины плотных пород – 300-350 г/м2.
- Старое рулонное покрытие – 500 г/м2.
Самый большой расход битумного праймера характерен для покрытия с крупно- или мелкозернистой посыпкой. Здесь на 1 м2 поверхности может тратиться до 1 кг пропитки. Расход битумного праймера на 1 м2 бетонной поверхности составляет, как и для штукатурки, около 250-300 г/м2.
Уменьшить указанные значения можно, если тщательно проводить очистку основания перед праймированием. Этот этап ни в коем случае не стоит пропускать, поскольку пыль и грязь впитывают часть грунтовки, увеличивая ее расход.
Обратите внимание: расход пропитки зависит и от новизны основания. Чем более изношена поверхность, тем больше для ее обработки потребуется грунтовки. Это легко объясняется, поскольку с течением времени в основании появляются трещины, оно становится более пористым, а поэтому сильнее впитывает битум.
Популярные производители битумных праймеров
На отечественном рынке особую популярность приобрели битумные праймеры «ТехноНИКОЛЬ» (ISOBOX) и Decken. В ассортименте компании «АльфаКров» представлены самые популярные типы такой пропитки. Они поставляются напрямую от изготовителей, поэтому их качество соответствует заявленному, а стоимость не завышена. Примеры качественных пропиток на основе битума:
- Праймер битумный «ТехноНИКОЛЬ» №01. Универсальный и самый популярный состав на основе органического растворителя. Пропитка уже готова к применению, подходит для гидроизоляции цементных стяжек, бетонных поверхностей и кровель. Расход битумного праймера №01 составляет 250-350 мл/м2.
Битумный праймер «ТехноНИКОЛЬ» №01
- Праймер битумный «ТехноНИКОЛЬ» №02. Концентрат предыдущего состава (№01). Удобен, когда необходимо покрыть очень большую площадь, поскольку за счет разведения количество пропитки увеличивается. Рекомендованная пропорция для разведения состава – 1:2.
- Праймер битумный «ТехноНИКОЛЬ» №03. Производится с добавлением полимеров, обладает повышенной способностью к адгезии, а за счет специфических добавок имеет увеличенные гидрофобные свойства. Подходит для нанесения на металл, трубопроводы и неоднородные поверхности. Расход битумного праймера «ТехноНИКОЛЬ» №03 на 1 м2тоже составляет 250-350 мл.
Праймер «ТехноНИКОЛЬ» №03
- Праймер битумный AquaMast «ТехноНИКОЛЬ». Предназначен только для наружных работ. Может применяться как в сочетании с рулонной гидроизоляцией, так и в качестве самостоятельного средства.
Праймер AquaMast «ТехноНИКОЛЬ»
- Праймер битумный ISOBOX. Характеризуется специально подобранными органическими растворителями. Может применяться для самоклеящейся кровли, бетонного основания, цементно-песчаной стяжки.
Битумный праймер ISOBOX
- Праймер битумный DECKEN. Однокомпонентный состав, уже готовый к применению. Содержит стабилизирующие добавки для еще большего улучшения адгезии рулонного материала или наносимой мастики с кровлей.
Праймер битумный DECKEN
Битумно-полимерный праймер DECKEN
В заключение
Битумный праймер – качественный и недорогой состав, который позволяет повысить гидроизоляционные свойства мастик и мягких рулонных материалов. Кроме кровли пропитку можно использовать для любых других конструкций. Для этого применяются универсальные или узкоспециализированные праймеры. Их очень просто наносить, а за счет экономичного расхода подготовка основания к изоляционным работам обходится недорого.
характеристик и расход на 1 м2 |
Грунтовка — это уникальный раствор, который используется для подготовки определенной поверхности к отделке, например, покраске. Использование такой строительной смеси позволяет выровнять поверхность, избавиться от любых дефектов на стене и устранить мелкие трещинки.
Один из самых популярных видов грунтовки — бетонно-контактный, использование которого значительно упрощает дальнейшие отделочные работы.
Основные характеристики и свойства
Бетон контактный — строительная смесь на основе акрила, также в ее состав входят цемент, песок и специальные добавки.Эту смесь активно используют для увеличения сцепления плохо впитывающей влагу поверхности перед штукатурными, плиточными и другими отделочными работами.
Среди его основных преимуществ:
- высокая скорость сушки. Дальнейшие отделочные работы можно начинать через несколько часов после нанесения грунтовки;
- устойчивость к влаге. В процессе сушки образуется специальная пленка, не пропускающая воду;
- прочность. По заявлению производителя, бетонное покрытие не теряет своих качеств 80 лет.
Благодаря своим непревзойденным свойствам, бетоно-склеивание зарекомендовало себя как уникальный материал, который отличается прочностью, не требует много времени для высыхания и не пропускает влагу. Именно по этим свойствам можно не беспокоиться о качестве сделанного ремонта.
Как определить расход бетона на контакт?
Расход бетонного контакта на 1 м2 зависит от многих факторов, среди которых первое место занимают особенности обрабатываемой поверхности.Важен не тип самой поверхности, а пористость. От этого зависит, сколько праймера впитается, что напрямую влияет на его расход на 1 м2.
Таблица расхода грунтовки контактного бетона от разных производителей
В зависимости от пористости различают следующие типы поверхностей:
- Пористые поверхности, в состав которых входит кирпич или песчаник. Грунтовка достаточно интенсивно впитывается, что приводит к расходу контакта бетона до 0.5 кг на м2. Если пористость слишком велика, то поверхность необходимо предварительно обработать специальными растворами.
- Поверхности со средней пористостью. К ним относятся бетон, бетонная плитка. Расход бетонного контакта составляет около 0,3 кг на м2.
- Малопористые поверхности, для которых расход грунтовки минимален — 0,1-0,2 кг на м2.
Перед проведением работ необходимо определить тип поверхности и уровень расхода грунтовки на 1 м2.Для этого нанесите раствор грунтовки на определенный участок. Налейте немного раствора в емкость, определите вес и начните наносить ровно 1 м2 площади. После этого снова измеряем вес, и на основании полученных данных можно будет сделать вывод о количестве грунтовки для контакта с бетоном, необходимой для обработки всей поверхности. Такие расчеты позволяют не покупать лишний материал.
Можно ли снизить расход грунтовки?
Большинство людей задаются вопросом, можно ли снизить расход грунтовочного бетона.Ответ однозначно отрицательный. Во-первых, эта строительная смесь доступна по доступным ценам, поэтому экономить на ней нет смысла. Дополнительно
Адгезионная грунтовка: технические характеристики, свойства, применение
.Рынок современных строительных материалов постоянно пополняется новыми композициями. У них улучшилась производительность. Это позволяет быстрее проводить строительные и ремонтные работы. Конечный результат с применением инновационных технологий — высокого качества. Одним из важных инструментов, который используют при отделочных работах, является клеящая грунтовка.
В категорию представленных средств вошли несколько различных составов. Чтобы выбрать подходящий вариант строительно-ремонтных работ, необходимо учитывать технические характеристики, особенности каждого вида грунтовки.
общие характеристики
Домашний ремонт в квартире связан с массой вопросов. Какой материал для отделочных работ потребуется в том или ином случае, многие владельцы частной собственности не знают. Поэтому советы опытных мастеров по ремонту помогут в решении этого вопроса.
Адгезией называется способность основы плотно прилегать к поверхности. При этом нанесенный на поверхность слой не отслаивается. Он будет держаться на земле еще долго. Некоторым материалам требуется повышенная адгезия. В этом случае используется специальный грунт.
В продаже имеется множество подобных составов. Они способны более или менее усиливать сцепление поверхности. При выборе важно учитывать характеристики, на которых нанесено основание. Есть грубые и гладкие материалы.При их обработке грунтовка должна обладать не только адгезионными свойствами. В подобных составах присутствует ряд дополнительных эффектов.
Шероховатые поверхности
Свойства адгезивной грунтовки могут существенно различаться в зависимости от типа состава. Все поверхности, на которые наносятся представленные материалы, условно разделены на две группы. Это грубые и гладкие основы. При выборе грунтовки важно учитывать тип поверхности, на которую она будет наноситься.
Все клеевые грунтовки, которые используются для грунтовки, различаются по ряду характеристик. Обладают высокой пробивающей способностью. Даже пыльные поверхности качественно склеиваются, укрепляются. Начальные характеристики базы в этом случае заметно улучшаются.
Поры поверхностей закрыты. Расход отделочных материалов в этом случае значительно снижается. Краска, клей, штукатурка впитываются равномерно. Присутствие в составе грунтовки специальных компонентов может препятствовать развитию грибка на поверхностях, плесени.
Гладкие поверхности
Следует отметить, что грунтовка для бетона может существенно отличаться от аналогичных средств для пластика. Существует большой перечень поверхностей, не имеющих пор, не обладающих высокой впитывающей способностью. Для них вышеуказанная грунтовка не подходит.
Гладкие поверхности включают пластик, стекло, металл, краску и другие подобные материалы. Именно для них используются составы, которые называют праймерами. Обладают высокой клеящей способностью. Такие составы делают поверхность шероховатой.Отделку в этом случае можно качественно закрепить на земле.
Одним из самых популярных материалов, применяемых в данном случае, является «Бетонконтакт». Его производят многие крупные компании. Состав таких грунтовок существенно отличается от средств, предназначенных для шероховатых поверхностей.
Состав
Чтобы понять, в чем разница между адгезивной грунтовкой и контактной бетонной смесью? какой материал купить для разных поверхностей, необходимо учитывать их состав.Представленные изделия изготовлены на основе полимеров. В них добавляют кварцевый песок определенной фракции. Чем он меньше, тем тоньше будет слой застывшей пленки от грунтовки на поверхности.
Для составов, предназначенных для гладких поверхностей, характеризующихся наличием большего количества адгезионных компонентов. Если фракция песка большая, поверхность будет более шероховатой. Поэтому важно продумать, какой вид отделки будет нанесен впоследствии.
Помимо вышеперечисленных компонентов, праймер может включать дополнительные компоненты.Они придадут композиции водоотталкивающие, антибактериальные, антикоррозионные свойства. Следует отметить, что, независимо от разновидности, все почвы паропроницаемы. Это положительная характеристика материала.
Назначение
Ремонт дома в квартире с покупкой необходимых материалов. Необходимо заранее выяснить, в каких случаях без грунтовки не обойтись. В первую очередь его используют при проведении облицовки. Перед укладкой плитки, ламината, наливных полов или линолеума используется грунтовка.
Представленный состав необходимо нанести на поверхность перед покраской. Это значительно продлевает срок службы отделки. Для латексных, акриловых, водных, масляных и других красок подбирайте определенный состав.
Еще одно применение грунтовки — штукатурка. Нанесение стартовых и финишных составов невозможно без клеящих средств. Это становится особенно актуальным при толщине слоя штукатурки от 3 см. При этом отделка не скользит, не разрушается.
Действие грунтовки
Грунтовочные составы можно разделить на две группы. В первую категорию входят армирующие материалы. Во вторую группу вошел грунтовочный проникающий клей.
Укрепляющие составы отличаются значительно повышенным сцеплением отделки с базой. Дисперсия наполнителя в этой грунтовке намного больше. Это обеспечивает максимальную адгезию к гладким поверхностям. Если вы хотите создать на гладком материале слой отделки, в котором нет пор, наносите именно армирующие составы.Они увеличивают прочность поверхности, на которую наносятся.
Грунтовки глубокого проникновения используются для пористых материалов. Они содержат гораздо меньшее количество дисперсных частиц. Такие составы проникают внутрь поверхностей на глубину до 10 см. T
Оценка стоимости плана потребления в Функциях Azure
- 8 минут на чтение
В этой статье
В настоящее время существует три типа планов хостинга для приложения, работающего в Функциях Azure, причем каждый план имеет свою модель ценообразования:
План | Описание |
---|---|
Потребление | Вы платите только за время работы вашего приложения-функции. Этот план включает бесплатный грант для каждой подписки. |
Премиум | Предоставляет те же функции и механизм масштабирования, что и план потребления, но с повышенной производительностью и доступом к виртуальной сети. Стоимость зависит от выбранного вами ценового уровня. Чтобы узнать больше, см. План Azure Functions Premium. |
Выделенный (служба приложений) (базовый уровень или выше) | Если вам нужно работать на выделенных виртуальных машинах или изолированно, используйте настраиваемые образы или вы хотите использовать избыточную емкость плана службы приложений.Использует обычный тарифный план службы приложений. Стоимость зависит от выбранного вами ценового уровня. |
Вы выбрали план, который наилучшим образом соответствует вашим требованиям к производительности и затратам. Дополнительные сведения см. В разделе Масштабирование и размещение функций Azure.
В этой статье рассматривается только план потребления, поскольку этот план приводит к переменным затратам. Эта статья заменяет собой статью часто задаваемых вопросов по выставлению счетов по плану потребления.
Durable Functions также могут выполняться в плане потребления.Чтобы узнать больше о затратах при использовании долговременных функций, см. Выставление счетов за долговременные функции.
Стоимость плана потребления
Выполнение Стоимость выполнения одной функции измеряется в ГБ-секунд . Стоимость выполнения рассчитывается путем объединения использования памяти со временем выполнения. Функция, которая работает дольше, стоит дороже, как и функция, потребляющая больше памяти.
Рассмотрим случай, когда объем памяти, используемый функцией, остается постоянным.В этом случае расчет стоимости производится простым умножением. Например, предположим, что ваша функция потребляет 0,5 ГБ в течение 3 секунд. Тогда стоимость выполнения составит 0,5 ГБ * 3 с = 1,5 ГБ-секунды
.
Поскольку использование памяти изменяется со временем, расчет по существу является интегральным значением использования памяти с течением времени. Система выполняет этот расчет, измеряя использование памяти процессом (вместе с дочерними процессами) через регулярные промежутки времени. Как указано на странице цен, объем используемой памяти округляется до ближайшего сегмента 128 МБ.Когда ваш процесс использует 160 МБ, взимается плата за 256 МБ. При расчете учитывается параллелизм, то есть одновременное выполнение нескольких функций в одном процессе.
Примечание
Хотя использование ЦП напрямую не учитывается в стоимости выполнения, оно может повлиять на стоимость, если влияет на время выполнения функции.
Для функции, запускаемой HTTP, когда ошибка возникает до того, как код функции начинает выполняться, с вас не взимается плата за выполнение.Это означает, что 401 ответ от платформы из-за проверки ключа API или функции аутентификации / авторизации службы приложений не засчитывается в ваши затраты на выполнение. Точно так же ответы с кодом состояния 5xx не учитываются, если они происходят на платформе до обработки запроса функцией. Ответ 5xx, сгенерированный платформой после того, как ваш код функции начал выполняться, по-прежнему считается выполнением, даже если код вашей функции не вызывает ошибку.
При оценке общей стоимости выполнения функций в любом плане помните, что среда выполнения функций использует несколько других служб Azure, каждая из которых оплачивается отдельно.При расчете цен на функциональные приложения любые триггеры и привязки, которые у вас интегрируются с другими службами Azure, требуют, чтобы вы создали и оплатили эти дополнительные службы.
Для функций, работающих в плане потребления, общая стоимость — это стоимость выполнения ваших функций, плюс стоимость полосы пропускания и дополнительных услуг.
При оценке общих затрат на ваше приложение-функцию и связанные службы используйте калькулятор цен Azure.
Сопутствующие затраты | Описание |
---|---|
Счет хранения | Для каждого приложения-функции требуется связанная учетная запись хранилища Azure общего назначения, которая оплачивается отдельно. Эта учетная запись используется внутри среды выполнения функций, но вы также можете использовать ее для триггеров и привязок хранилища. Если у вас нет учетной записи хранения, она создается для вас при создании приложения-функции. Дополнительные сведения см. В разделе Требования к учетной записи хранения. |
Application Insights | Functions полагается на Application Insights для обеспечения высокопроизводительного мониторинга ваших приложений-функций. Хотя это и не обязательно, вам следует включить интеграцию с Application Insights.Ежемесячно бесплатно предоставляются телеметрические данные. Дополнительные сведения см. На странице цен на Azure Monitor. |
Пропускная способность сети | Вы не платите за передачу данных между службами Azure в одном регионе. Однако вы можете понести расходы на исходящую передачу данных в другой регион или за пределы Azure. Чтобы узнать больше, см. Сведения о ценах на пропускную способность. |
Поведение, влияющее на время выполнения
Следующее поведение ваших функций может повлиять на время выполнения:
Триггеры и привязки : время, необходимое для чтения ввода и записи вывода в привязки функций, считается временем выполнения.Например, когда ваша функция использует привязку вывода для записи сообщения в очередь хранилища Azure, время выполнения включает время, затраченное на запись сообщения в очередь, которое включается в расчет стоимости функции.
Асинхронное выполнение : время, в течение которого ваша функция ожидает результатов асинхронного запроса (
await
в C #), считается временем выполнения. Расчет в ГБ-секунде основан на времени начала и окончания функции и использовании памяти за этот период.То, что происходит за это время с точки зрения активности ЦП, не учитывается в расчетах. Вы можете снизить затраты во время асинхронных операций, используя устойчивые функции. Вам не выставляется счет за время, потраченное на ожидание в функциях оркестратора.
В счете-фактуре вы можете просмотреть связанные с затратами данные Всего выполнения — Функции и Время выполнения — Функции , а также фактические затраты, выставленные в счет. Однако эти данные счета-фактуры являются ежемесячными агрегированными данными за прошлый период счета-фактуры.
Функция метрики на уровне приложения
Чтобы лучше понять влияние ваших функций на стоимость, вы можете использовать Azure Monitor для просмотра связанных с затратами показателей, которые в настоящее время генерируются вашими приложениями-функциями. Для получения этих данных можно использовать либо обозреватель метрик Azure Monitor на портале Azure, либо REST API.
Обозреватель показателей монитора
Используйте обозреватель метрик Azure Monitor для просмотра данных о затратах для ваших приложений-функций плана потребления в графическом формате.
В верхней части портала Azure в Службы поиска, ресурсы и документы найдите
monitor
и выберите Monitor в разделе Services .Слева выберите Метрики > Выберите ресурс , затем используйте настройки под изображением, чтобы выбрать приложение-функцию.
Настройка Рекомендуемое значение Описание Подписка Ваша подписка Подписка с вашим приложением-функцией. Группа ресурсов Ваша группа ресурсов Группа ресурсов, содержащая ваше приложение-функцию. Тип ресурса Службы приложений Приложения-функции отображаются в Monitor как экземпляры служб приложений. Ресурс Приложение с функциями Приложение-функция для мониторинга. Выберите Применить , чтобы выбрать приложение-функцию в качестве ресурса для мониторинга.
Из метрики выберите Счетчик выполнения функций и Сумма для агрегирования .Это добавляет на график сумму подсчетов выполнения за выбранный период.
Выберите Добавить метрику и повторите шаги 2–4, чтобы добавить на диаграмму Единицы выполнения функции .
Результирующая диаграмма содержит итоги для обеих метрик выполнения в выбранном временном диапазоне, который в данном случае составляет два часа.
Поскольку количество исполнительных единиц намного больше, чем количество выполнений, диаграмма просто показывает исполнительные единицы.
На этой диаграмме показано в общей сложности 1,11 миллиарда единиц выполнения функций
, потребленных за двухчасовой период, измеренный в МБ-миллисекундах. Чтобы преобразовать в ГБ-секунды, разделите на 1024000. В этом примере приложение-функция потребило 1110000000/1024000 = 1083,98
ГБ-секунд. Вы можете взять это значение и умножить на текущую цену времени выполнения на странице цен на функции, которая даст вам стоимость этих двух часов, при условии, что вы уже использовали какие-либо бесплатные гранты времени выполнения.
Azure CLI
В Azure CLI есть команды для получения метрик. Вы можете использовать интерфейс командной строки из локальной командной среды или непосредственно с портала с помощью Azure Cloud Shell. Например, следующая команда az monitor metrics list возвращает почасовые данные за тот же период времени, который использовался ранее.
Не забудьте заменить
идентификатором подписки Azure, выполнив команду.
az список показателей монитора --resource / subscriptions / / resourceGroups / metrics-testing-Consulting / sizes / Microsoft. Web / sites / metrics-testing-usage --metric FunctionExecutionUnits, FunctionExecutionCount --aggregation Total --interval PT1H --start-time 2019-09-11T21: 46: 00Z --end-time 2019-09-11T23: 18: 00Z
Эта команда возвращает полезную нагрузку JSON, которая выглядит следующим образом:
{
«стоимость»: 0,0,
«интервал»: «1:00:00»,
"namespace": "Microsoft.Web / sites",
"resourceregion": "centralus",
"timespan": "2019-09-11T21: 46: 00Z / 2019-09-11T23: 18: 00Z",
"значение": [
{
«id»: «/ subscriptions / XXXXXXX-XXXX-XXXX-XXXX-XXXXXXXXXXX / resourceGroups / metrics-testing-usage / sizes / Microsoft.Веб / сайты / показатели-тестирование-потребление / поставщики / Microsoft.Insights / metrics / FunctionExecutionUnits ",
"имя": {
"localizedValue": "Единицы выполнения функции",
"значение": "FunctionExecutionUnits"
},
"resourceGroup": "показатели-тестирование-потребление",
"Временные ряды": [
{
"данные": [
{
"средний": ноль,
"count": ноль,
«максимум»: ноль,
«минимум»: ноль,
"timeStamp": "2019-09-11T21: 46: 00 + 00: 00",
"всего": 793294592. 0
},
{
"средний": ноль,
"count": ноль,
«максимум»: ноль,
«минимум»: ноль,
"timeStamp": "2019-09-11T22: 46: 00 + 00: 00",
«всего»: 316576256.0
}
],
"метаданные": []
}
],
"type": "Microsoft.Insights / metrics",
"unit": "Count"
},
{
«id»: «/ subscriptions / XXXXXXX-XXXX-XXXX-XXXX-XXXXXXXXXXX / resourceGroups / metrics-testing-usage / sizes / Microsoft.Веб / сайты / показатели-тестирование-потребление / поставщики / Microsoft.Insights / metrics / FunctionExecutionCount ",
"имя": {
"localizedValue": "Счетчик выполнения функции",
"значение": "FunctionExecutionCount"
},
"resourceGroup": "показатели-тестирование-потребление",
"Временные ряды": [
{
"данные": [
{
"средний": ноль,
"count": ноль,
«максимум»: ноль,
«минимум»: ноль,
"timeStamp": "2019-09-11T21: 46: 00 + 00: 00",
«всего»: 33538. 0
},
{
"средний": ноль,
"count": ноль,
«максимум»: ноль,
«минимум»: ноль,
"timeStamp": "2019-09-11T22: 46: 00 + 00: 00",
«всего»: 13040,0
}
],
"метаданные": []
}
],
"type": "Microsoft.Insights / metrics",
"unit": "Count"
}
]
}
Этот конкретный ответ показывает, что с 2019-09-11T21: 46
до 2019-09-11T23: 18
приложение потребляло 1110000000 МБ-миллисекунд (1083.98 ГБ-секунд).
Показатели функционального уровня
Единицы выполнения функции — это сочетание времени выполнения и использования памяти, что затрудняет понимание использования памяти. Данные о памяти в настоящее время недоступны в Azure Monitor. Однако, если вы хотите оптимизировать использование памяти своим приложением, можете использовать данные счетчика производительности, собранные Application Insights.
Включите Application Insights в приложении-функции, если вы еще этого не сделали.Если эта интеграция включена, вы можете запрашивать эти данные телеметрии на портале.
Определить использование памяти
В разделе Monitoring выберите Logs (Analytics) , затем скопируйте следующий запрос телеметрии и вставьте его в окно запроса и выберите Run . Этот запрос возвращает общее использование памяти в каждый момент выборки.
счетчики производительности
| где name == "Private Bytes"
| отметка времени проекта, имя, значение
Результат выглядит следующим образом:
отметка времени [UTC] | название | значение |
---|---|---|
12.09.2019, 1:05:14.947 утра | байтов частного пользования | 209 932 288 |
12.09.2019, 1: 06: 14.994 AM | байтов частного пользования | 212 189 184 |
12. 09.2019, 1: 06: 30.010 AM | байтов частного пользования | 231 714 816 |
12.09.2019, 1: 07: 15.040 AM | байтов частного пользования | 210,591,744 |
12.09.2019, 1: 12: 16 285 AM | байтов частного пользования | 216 285 184 |
12.09.2019, 1:12:31.376 AM | байтов частного пользования | 235 806 720 |
Определить продолжительность
Azure Monitor отслеживает метрики на уровне ресурсов, которым для функций является приложение-функция. Интеграция Application Insights генерирует метрики для каждой функции. Вот пример аналитического запроса для получения средней продолжительности функции:
customMetrics
| где имя содержит "Продолжительность"
| расширить averageDuration = valueSum / valueCount
| суммировать averageDurationMilliseconds = avg (averageDuration) по имени
название | среднее ПродолжительностьМиллисекунды |
---|---|
QueueTrigger AvgDurationMs | 16. 087 |
QueueTrigger MaxDurationMs | 90,249 |
Мин. Длительность триггера очереди, мс | 8,522 |
Следующие шаги
советов по эффективному процессу
Праймерынеобходимы для инициирования амплификации ДНК, будь то в целях обнаружения, клонирования или секвенирования. Таким образом, очень важно понимать, как успешно создавать праймеры. Вот четыре совета по эффективному дизайну грунтовки и управлению грунтовкой.
Основные правила проектирования грунтовки
Созданный вами праймер влияет на весь процесс амплификации ДНК. ДНК-полимеразы, ферменты, катализирующие репликацию ДНК, могут инициировать процесс репликации только путем добавления нуклеотидов к праймерам. Чтобы получить желаемую последовательность ДНК, вы должны начать с правильного праймера. Таким образом, для успешной амплификации ДНК необходим правильный дизайн праймера. Вот 14 основных рекомендаций по созданию праймеров:
- Грунтовки всегда указываются от 5 до 3 футов, слева направо. Убедитесь, что ваши праймеры разработаны и заказаны в правильной ориентации.
- Праймеры для ПЦР и секвенирования должны иметь длину от 18 до 25 нуклеотидов.
- Праймеры для ПЦР и секвенирования должны иметь содержание GC от 40 до 60%, причем 3 ‘праймера заканчивается на C или G, чтобы способствовать связыванию.
- 3′-конец праймера должен точно совпадать с ДНК-матрицей, потому что удлинение ДНК-полимеразой во время ПЦР зависит от хорошего совпадения на 3′-конце.
- Убедитесь, что на последних 5 основаниях на 3′-конце грунтовки есть не менее 2 оснований G или C (зажим GC).Пары оснований G-C имеют более прочную связь, чем пары оснований A-T (3 водородные связи против 2).
- Если сайт рестрикции был добавлен на конец праймера, обычно 5-6 нуклеотидов добавляют к 5 ’сайту рестрикционного фермента (также известному как« лидерная последовательность ») в праймер, чтобы обеспечить эффективное разрезание.
- Старайтесь избегать запусков из 4 или более одного основания или динуклеотидных повторов (например, ACCCC или ATATATAT), так как это может привести к ошибочному запуску праймера.
- Избегайте участков вторичной структуры; а именно внутрипраймерная гомология (более 3 оснований, которые комплементарны внутри праймера) или межпраймерная гомология (прямой и обратный праймеры, имеющие комплементарные последовательности).Эти обстоятельства могут привести к самодимерам / шпилькам или димерам праймеров вместо отжига с желаемыми последовательностями ДНК. Таким образом обеспечивается сбалансированное распределение доменов с высоким содержанием GC и AT. Такие инструменты, как IDT Oligo Analyzer, могут помочь вам обнаружить вторичную структуру.
- В общем, значение ΔG для анализа димеров должно быть от 0 до -9 ккал / моль для оптимального проектирования. Более отрицательные значения могут отрицательно повлиять на реакции ПЦР.
- Для шпильки температура плавления (Tm) шпильки должна быть ниже температуры отжига для реакции; в среднем она должна находиться в диапазоне от 55 ° C до 65 ° C.Tm для самой прочной шпильки должна быть не менее 50 ° C и ниже температуры отжига. Если Tm вашего праймера очень низкая, попробуйте найти последовательность с большим содержанием GC или немного увеличьте длину праймера. Пары праймеров
- должны иметь одинаковую Tm с максимальной разницей в 5 ° C и не должны дополнять друг друга.
- Если вы используете праймеры для мутагенеза, постарайтесь расположить несоответствующие основания ближе к середине праймера.
- Проверьте специфичность ваших праймеров, чтобы они не связывались с другими геномными областями, с помощью NCBI Primer BLAST или UCSC in-silico PCR.
- Чтобы проверить Tm, попробуйте реакцию ПЦР с градиентом температуры отжига, чтобы найти оптимальную Tm в соответствии с вашим праймером и ферментом.
Используйте правильные инструменты
На платформе Genome Compiler есть множество полезных инструментов, которые позволяют уникальным образом разрабатывать праймеры в соответствии с вашими конкретными потребностями. Благодаря встроенным в программное обеспечение алгоритмам Primer3, возможности варьируются от автоматического конструирования праймеров для обнаружения, клонирования праймеров и праймеров для скорейшего секвенирования до адаптации дизайна ваших собственных праймеров с помощью функции ручного создания праймеров Genome Compiler. Кроме того, Genome Compiler имеет пошаговых мастеров, помогающих с дизайном праймеров и олигонуклеотидов для лигирования рестрикции и сборки Гибсона. На протяжении всего процесса проектирования Genome Compiler также будет компилировать любые ошибки проектирования, такие как слишком высокое или слишком низкое содержание GC, или нежелательная Tm и т. Д., С прямым подключением к олигоанализатору IDT для проверки образования гетеро / гомодимеров. Использование этих полезных инструментов упростит процесс разработки праймеров и снизит риск ошибок.
Организация — это ключ!
После того, как вы спроектировали свои грунтовки, крайне важно правильно их хранить, чтобы использовать их наилучшим образом.Лучше всего хранить праймеры в библиотеках праймеров, новой функции Genome Compiler. Эта новая функция позволяет:
- Импортируйте праймеры, сохраненные в виде файлов на вашем компьютере, в библиотеку праймеров программы.
- Найдите в библиотеках ранее разработанные праймеры, которые отжигаются с вашей текущей последовательностью, а затем «присоедините» их.
- Создайте в программе новые праймеры и сохраните их в своей библиотеке для дальнейшего использования.
Таким образом, сохранив все ваши праймеры в библиотеке, вы избежите ненужного перепроектирования и повторного заказа праймеров, сэкономив время и деньги.Библиотеки праймеров делают лабораторию более организованной и, следовательно, более эффективной.
Используйте возможности совместного использования
Благодаря функции библиотеки праймеров Genome Compiler не только все ваши ранее созданные праймеры сохраняются и легко доступны, они также могут быть переданы другим. Целыми папками библиотеки праймеров можно удобно поделиться с коллегами в вашей лаборатории или где-либо еще, просто введя их электронные письма с помощью функции «Совместное использование». Кроме того, вы можете выбрать, предоставлять ли права на редактирование или только на чтение.Все общие праймеры будут доступны как вам, так и вашим коллегам в любое время, а изменения, внесенные кем-либо, можно отслеживать. Эта функция делает сотрудничество невероятно простым, поощряя партнерство и совместные инновации.
Хороший дизайн праймеров незаменим для хорошего эксперимента, поэтому помните об этом совете во время вашего следующего проекта генетических исследований. Дополнительная информация о дизайне праймеров и функциях библиотеки праймеров в Genome Compiler доступна в нашем руководстве пользователя.
Рэйчел Люстбейдер
Понимание эффективности КПЦР и почему она превышает 100%
Количественная полимеразная цепная реакция (или КПЦР) — это хорошо зарекомендовавший себя метод количественного определения нуклеиновых кислот, который до сих пор считается методом выбора в большинстве областей молекулярной биологии. Хотя существуют различные типы количественной оценки qPCR (абсолютные и относительные), определение эффективности амплификации должно быть среди первых вещей, которые должен сделать при настройке анализа qPCR. Понимание эффективности и способов ее расчета имеет решающее значение для точной интерпретации данных.
В идеале количество молекул целевой последовательности должно удваиваться в течение каждого цикла репликации, что соответствует 100% эффективности амплификации. Точно так же, если количество реплицированных молекул меньше, чем в два раза, это связано с низкой эффективностью — ниже 100%. Наиболее частыми причинами более низкой эффективности являются плохой дизайн праймера и неоптимальные концентрации реагентов или условия реакции .Вторичные структуры, такие как димеры и шпильки или неподходящие температуры плавления (Tm), могут влиять на отжиг матрицы праймеров, что приводит к плохой амплификации. Поскольку каждое дополнительное разведение содержит соответственно более низкие исходные количества ДНК, возникают различия между значениями Ct в серийно разведенных образцах (см. Ниже).
Одним из способов расчета эффективности амплификации является серийное разведение мишени. Как только вы получите их значения Ct, нанесите их на логарифмический масштаб вместе с соответствующими концентрациями. Затем сгенерируйте кривую линейной регрессии по точкам данных и вычислите наклон линии тренда. Наконец, эффективность рассчитывается с использованием уравнения: E = -1 + 10 (-1 / наклон) . Или используйте , этот калькулятор , который сделает всю работу за вас. Убедитесь, что понимаете, что влияет на наклон кривой усиления, иначе это может ввести в заблуждение.
Обычно желаемая эффективность амплификации составляет от 90% до 110% . Теоретический максимум 100% указывает на то, что фермент полимераза работает с максимальной производительностью. Как тогда вообще возможен КПД более 100%? Это будет означать, что в каждом цикле кПЦР генерируется более двух копий последовательности, верно?
Пипетирование 96- и 384-луночных планшетов может быть очень утомительной и утомительной задачей. Использование таких инструментов для дозирования, как Pipetting Aid PlatR , может значительно улучшить вашу точность, сохраняя при этом спокойствие и расслабленность.
Эффективность усиления превышает 100%, как это может быть?
Инфографика: Оптимальная эффективность КПЦР
Основная причина этого — ингибирование полимеразы . Даже если к смеси реагентов добавить больше шаблона, значения Ct могут не сдвинуться к более ранним циклам. Это сглаживает график КПД, что приводит к более низкому наклону и эффективности усиления более 100%. Ингибиторы фермента полимеразы включают избыточных количества ДНК / РНК или переносимого материала в образце.Общие загрязнители включают гепарин, гемоглобин, полисахариды, хлорофиллы, протеиназу К, ацетат натрия и т. Д.). Различные другие также могут быть перенесены , со стадии выделения ДНК / РНК, например этанол, фенол и SDS.
Если в концентрированных образцах присутствуют ингибиторы, требуется больше циклов для преодоления порога обнаружения по сравнению с образцами без ингибиторов. Ингибирование более вероятно в более концентрированных образцах, и один из способов улучшить наклон кривой — разбавить образец.Это хороший способ проверить, действительно ли проблема заключается в торможении.
Ингибирование амплификации в концентрированном образце выглядит так. 10-кратные разведения должны быть разделены на 3,3 цикла, но в этом случае концентрированные и разбавленные образцы ближе.
Давайте посмотрим на простой пример. При 10-кратном разбавлении образца основная математика говорит нам, что ΔCt между двумя разбавлениями должно быть около 3,3 при 100% эффективности амплификации. Однако, если присутствуют ингибиторы, ΔCt между двумя разведениями образца может снизиться, скажем, до 2.8. Это значение, вероятно, снова приблизится к 3,3 в точке наиболее разбавленного образца, где ингибирование меньше. Поскольку ингибиторы разбавляются вместе с ДНК / РНК , более высокие разведения могут содержать более низкие концентрации, когда больше нет ингибирующего эффекта. Усиление снова работает на полную мощность, и сигнал выходит так, как должен.
Следовательно, значения ΔCt между концентрированным и разбавленным образцом меньше прогнозируемого, что приводит к эффективности амплификации выше 100%.
Даже если в исходной смеси реагентов присутствует больше матрицы, значения Ct могут не сдвинуться соответствующим образом из-за ингибирования, что сглаживает график эффективности, что приводит к более низкому наклону и эффективности амплификации более 100%.
Этого артефакта обычно можно избежать, используя сильно разбавленные образцы. Если происходит ингибирование, концентрированные образцы следует исключить из анализа при расчете эффективности. Точно так же следует исключить большинство разбавленных образцов в случае высокой вариабельности из-за стохастического эффекта. Следовательно, нецелесообразно включать очень концентрированные или очень разбавленные образцы в количественное исследование.
Вам трудно оставаться последовательным при дозировании при выполнении нескольких анализов qPCR? Ты не одинок. Мы разработали Pipetting Aid PlatR , чтобы легко решить эти проблемы за вас. Запросите цитату сегодня.
Ингибирования можно легко избежать, проанализировав чистоту образцов ДНК / РНК с помощью спектрофотометрических измерений до количественной ПЦР. Чистота измеряется как отношение значений оптической плотности при 260 и 280 нм, которые соответствуют отношению нуклеиновых кислот к другим молекулам.Если оценка чистоты не опускается на выше 1,8 для ДНК или 2,0 для РНК , образцы следует очистить. Точно так же вы можете использовать другой метод подготовки проб. Если дополнительные этапы очистки не решают проблему, с образцом может быть трудно работать. В этом случае было бы хорошо рассмотреть мастер-микс qPCR, который более устойчив к ингибиторам.
Другими причинами эффективности более 100% могут быть ошибки пипетирования, активаторов полимеразных ферментов, ингибирование обратной транскриптазой , неточные серии разведений, неспецифические продукты и димеры праймеров при использовании интеркалирующих красителей (следует контролировать для каждой реакции отдельно) .Перед началом следующего анализа количественной ПЦР убедитесь, что ни один из них не вызывает нежелательных сдвигов ваших кривых амплификации.
Кратко рассмотрите основы эффективности кПЦР и объясните, почему она может превышать 100%, на видео ниже:
Primer3 Primer Design Tool — Unipro UGENE
Плагин для разработки праймеров UGENE Primer3 позволяет создавать праймеры. Вы можете предложить праймеры для полимеразной цепной реакции для создания сайтов с тегами последовательностей для гибридного картирования или для амплификации последовательностей для обнаружения однонуклеотидного полиморфизма и для других приложений.
Плагин для разработки праймеров Primer3 основан на широко используемом инструменте Primer3 с открытым исходным кодом (разработанный Стивом Розеном и Хелен Скалецки). Его интерфейс аналогичен веб-интерфейсу Primer3, поэтому, если вы использовали версию программы WWW, вам не потребуется много усилий для использования версии UGENE.
Настройка параметров конструкции праймера
У меня есть UGENE с открытой последовательностью. Чтобы вызвать плагин, нажмите кнопку «Primer3» или щелкните правой кнопкой мыши по просмотру последовательности и выберите «Analyze → Primer3».Диалог «Дизайн праймеров» откроется для дизайна праймеров. Он имеет множество опций, как и веб-интерфейс, но в конечном итоге он позволяет выполнять своего рода «виртуальную ПЦР». Таким образом, вы можете описать множество критериев конструирования праймеров, включая такие факторы, как температура плавления олигонуклеотидов, размер, содержание GC, размер продукта ПЦР, позиционные ограничения в исходной последовательности и многие другие.
С другой стороны, я буду запускать очень простой пример «виртуального PCR», чтобы показать вам, как работает плагин.Большинство настроек плагина по умолчанию строгие. Итак, я уточню цель. Целью может быть сайт простого повтора последовательности (микросателлитный) (например, повтор CA) или полиморфизм на основе одной пары оснований. Я буду указывать его с начальным значением 40 (что является индексом первой базы цели) и длиной 78. Допустимая пара праймеров должна фланкировать эту цель, поскольку она единственная указанная.
Я также хочу, чтобы Primer3 выбирал внутренний олигонуклеотид вместе с левым и правым праймерами.
Полученные праймеры сохраняются и отображаются в виде аннотаций. Вкладка «Настройки результатов» позволяет указать таблицу аннотаций, в которой будут содержаться результаты. Я назову группу результатов «грунтовками». Теперь нажимаю «Pick Primers».
Праймеры Спасательные
Найдены праймеры для выбранной последовательности. Группа аннотаций результатов содержит подгруппу для каждой найденной пары праймеров. . Левые праймеры и внутренние олигонуклеотиды расположены на прямой цепи, а правые праймеры расположены на цепи комплемента.Каждый праймер задается набором квалификаторов, которые содержат значения таких параметров, как три основных конца и любые меры самокомплементарности, процент GC и температура плавления.
Вот как можно создавать праймеры в UGENE.