- АИС органов государственной власти как зеркало их отношений с органами местного самоуправления
- Региональный портал государственных и муниципальных услуг
- Прочее
- Электронная запись к врачу
- медицина 1
- безопасность2
- безопасность1
- Семья и дети
- Паспорта, регистрации, визы
- Транспорт и вождение
- Образование
- Налоги и финансы
- Пенсия, пособия и льготы
- Лицензии, справки, аккредитации
- Квартира, строительство и земля
- Безопасность и правопорядок
- Работа и занятость
- Культура, досуг, спорт
- Бизнес, предпринимательство, НКО
- Производство и торговля
- Информация, связь и реклама
- Природопользование и экология
- Здравоохранение, медицина, лекарства
- Популярные
- Объединенной группировке войск (сил) по проведению контртеррористических операций на территории Северо-Кавказского региона РФ 15 лет
- ответ | Реформа контрольно-надзорной деятельности
- Новый командующий объединенной группировкой войск (сил) на Северном Кавказе представлен личному составу
- что єто такое и как его выбрать?
- РЕД СОФТ | Федеральная служба судебных приставов
- OGWs: 1814 Leeds, Bastard Twp
- Ozark Gateway Realty, OGW LLC
- Workshop Teamleiders OGW en sturen op OGW.
- MIR-NAT репрессируют трансляцию MAPT и способствуют протеостазу при нейродегенерации
- Противодействие предложенному дренажу карьера известняка в бассейн Мамонтовой пещеры
- Руководство по корпоративному сотрудничеству — Управление по борьбе с серьезным мошенничеством
- Посттранскрипционное подавление экспрессии генов в эмбрионах Xenopus малыми интерферирующими РНК
АИС органов государственной власти как зеркало их отношений с органами местного самоуправления
Федеральным законом №149 «Об информации, информационных технологиях и о защите информации» предусматривается процедура информационного взаимодействия между организациями на основании соответствующих соглашений. В то же время отдельными законодательными и подзаконными актами ограничивается состав и объём информации, предоставляемой в электронном виде сторонним пользователям. При этом если для органов государственной власти (ОГВ) порядок и возможность информационного взаимодействия в электронном виде хоть как-то находят отражение в нормативно-правовых документах, то органы местного самоуправления (ОМСУ) в большинстве случаев не упоминаются вовсе.
Опыт межведомственного информационного взаимодействия в электронном виде формировался первоначально (до 2010 года) в основном благодаря местной инициативе, но теперь превалирует влияние федерального центра.
При этом из-за отсутствия общегосударственных требований и рекомендаций по составу, структуре, форматам и порядку формирования даже одноименные информационные ресурсы не только на уровне муниципалитетов, но и на уровне субъектов федерации носят разнородный характер. Отсутствие же единой нормативно-справочной информации (НСИ) делает информационные ресурсы различных органов государственной власти, органов власти субъектов федерации и муниципалитетов трудно совместимыми или же несовместимыми совсем.
Кроме того, в сфере информатизации ОГВ и ОМСУ изначально поставлены федеральным законодательством в неравные условия.
ФЗ №131 «О местном самоуправлении» устанавливает направления деятельности и зоны ответственности ОМСУ, выход за рамки которых для дотационных муниципалитетов означает финансовое нарушение со всеми вытекающими последствиями. К сожалению, развитие и применение информационных технологий, формирование и актуализация информационных ресурсов для целей управления муниципалитетов в состав определенных ФЗ приоритетных направлений не вошли. Поэтому более 90% всех муниципалитетов России вынуждены работать в сфере информатизации по остаточному принципу, так как являются дотационными.
Кроме финансирования на зависимое положение ОМСУ в сфере информатизации влияет ряд других факторов:
- неравномерное развитие каналов широкополосной связи, ставящее сельские поселения особенно в районах Севера, Сибири и Дальнего Востока в немыслимые по нынешним временам условия;
- для значительной части из 24 с лишним тысяч муниципалитетов, не только на уровне поселений, но и для многих районов проведение работ по информатизации весьма проблематично в силу отсутствия в указанных населенных пунктах специалистов, обладающих необходимым опытом и квалификацией;
- практически полное отсутствие методических и типовых проектных решений для информатизации ОМСУ, во многом связанное с тем, что заказчиками всех успешных муниципальных АИС являются крупные города, которые финансово не заинтересованы в доведении их до типового уровня. Те же решения, которые до настоящего времени создавались как типовые по инициативе различных государственных структур, не в полной мере учитывают интересы и специфику работы ОМСУ и больше ориентированы на обеспечение информацией муниципального уровня соответствующих ведомственных АИС;
- другие факторы.
Межбюджетные отношения между органами государственной власти федерального и регионального уровня и ОМСУ за прошедший с 90-х годов прошлого века срок постоянно совершенствовались. Тем не менее до настоящего времени, по крайней мере, в сфере информатизации, не сформированы механизмы и не отработана практика финансирования мероприятий в интересах муниципалитетов из государственного или региональных бюджетов, в том числе и при условии долевого участия. Возможно, что только этим и объясняется практически полное отсутствие ОМСУ среди участников федеральных целевых программ и других мероприятий, проводимых на государственном уровне.
Вот при таких условиях происходило и продолжается создание, внедрение и дальнейшее развитие АИС ОГВ, что позволяет, не вдаваясь в специфику и особенности отдельных систем, выделить следующие основные общие проблемы ОМСУ:
1) ОМСУ в АИС ОГВ рассматриваются как поставщики предусмотренной законодательством информации органам власти различных уровней.
2) Предоставление необходимой для исполнения полномочий ОМСУ информации в полном объёме и актуальном формате не предусматривается, исключения составляют разве что типовые запросы.
3) Определение порядка и интерфейсов формирования, периодичности и состава предоставляемых в рамках АИС данных производится согласно принятым ОГВ нормативно-организационным решениям, подлежащим обязательному исполнению со стороны ОМСУ.
5) Применение систем электронного межведомственного взаимодействия в процессе функционирования АИС ОГВ накладывает на ОМСУ дополнительные технические и регламентные требования.
6) Эксплуатация АИС ОГВ предусматривает применение ведомственных ключей электронной цифровой подписи (ЭЦП), что означает для ОМСУ необходимость использования нескольких комплектов различных ключей ЭЦП.
7) Дублирование информации, предоставляемой ОМСУ в рамках АИС различным ОГВ.
8) Низкая степень унификации АИС различных ОГВ. Применение в АИС ОГВ ведомственной НСИ, так как общегосударственной НСИ у нас до настоящего времени нет.
9) Сотрудники ОМСУ вынуждены в большинстве случаев вводить данные для передачи в АИС ОГВ вручную, поскольку автоматический перенос информации из муниципальных АИС практически невозможен.
10) Подавляющее большинство АИС ОГВ используют иностранное программное обеспечение, а это существенно сдерживает полномасштабную работу ОМСУ по импортозамещению.
Этот перечень можно продолжить, но главное то, что привлечение ОМСУ к работе АИС ОГВ фактически перекладывает на них части функции государственной власти, не подкрепленные необходимым финансированием. Все это не только не способствует развитию муниципальной информатизации, а, напротив, понуждает направлять и без того скудные финансовые, технические и организационные ресурсы на несвойственные местной власти цели, сплошь и рядом в ущерб решению первоочередных проблем.
Иными словами, всё это мероприятия, предусматривающие участие органов местного самоуправления на добровольно-принудительной основе, по схеме «без меня меня женили».
Несмотря на то, что ОМСУ не входят в состав ОГВ, очевидно, что работа по муниципальной информатизации не может и не должна проводится в отрыве от развития информационных технологий российского государства. Муниципалитетам в дальнейшем развитии информатизации необходим постоянный тесный контакт с федеральными и региональными органами государственной власти. Хочется надеяться, что, наконец, удастся выработать механизмы такого взаимодействия на официально регламентированной постоянной основе.
Об авторе: Андрей Губов, председатель совета директоров «Фонда развития информационных технологий муниципалитетов» Конгресса муниципальных образований Российской Федерации, почётный член правления секции «Информатизация органов местного самоуправления» Ассоциации сибирских и дальневосточных городов.
Региональный портал государственных и муниципальных услуг
Прочее
Электронная запись к врачу
медицина 1
безопасность2
безопасность1
Семья и дети
Паспорта, регистрации, визы
Гражданство и въезд в РФ, регистрация граждан
Транспорт и вождение
Автомобильный, водный и воздушный транспорт
Образование
Дошкольное, среднее и высшее образование
Налоги и финансы
ИНН, налоговые задолженности, декларации и доходыПенсия, пособия и льготы
Пенсионные начисления и получение льгот для всех категорий граждан
Лицензии, справки, аккредитации
Отраслевые, профессиональные и личные справки, сертификаты, выписки и лицензии
Квартира, строительство и земля
ЖКХ, оформление прав, кадастровый учет и строительство
Безопасность и правопорядок
Работа и занятость
Профессиональное лицензирование, страхование работников и помощь безработным
Культура, досуг, спорт
Услуги, связанные с библиотеками, туризмом, охотой и спортом
Бизнес, предпринимательство, НКО
Оформление предпринимательской деятельности и других организаций
Производство и торговля
Производство, таможня, торговля и права потребителей
Информация, связь и реклама
Информационные технологии, СМИ, радиоэлектронные средства
Природопользование и экология
Водные ресурсы, недропользование, картография
Здравоохранение, медицина, лекарства
Получение медицинской помощи, оформление инвалидности
Популярные
Объединенной группировке войск (сил) по проведению контртеррористических операций на территории Северо-Кавказского региона РФ 15 лет
— 24 сентября 2014 г. —
Объединенной группировке войск (сил) по проведению контртеррористических операций на территории Северо-Кавказского региона РФ 15 лет
В пос. Ханкала (Чеченская Республика) состоялись праздничные мероприятия, посвященные 15-летию образования Объединенной группировки войск (сил) по проведению контртеррористических операций на территории Северо-Кавказского региона Российской Федерации.
В мероприятиях приняли участие Полномочный представитель Президента РФ в Северо-Кавказском федеральном округе Сергей Меликов, глава Чеченской Республики Герой России Рамзан Кадыров, начальник Главного штаба внутренних войск МВД России генерал-полковник Сергей Бунин, командующий ОГВ(с) генерал-лейтенант Сергей Власенко.
«Результаты проведенных мероприятий свидетельствуют о правильно выбранных формах и методах борьбы с бандитами. С момента образования ОГВ(с) силами группировки проведено свыше 40 тысяч результативных мероприятий, пресечена деятельность свыше 10 тысяч вооруженных террористов, уничтожено более 5 тысяч баз и бандитских схронов, изъято из преступного оборота более 30 тысяч единиц различных видов оружия, обезврежено свыше 80 тысяч фугасов и самодельных взрывных устройств. За мужество и героизм, проявленные при выполнении служебно-боевых задач в составе ОГВ (с), 93 военнослужащим внутренних войск МВД России присвоено звание Героя Российской Федерации, свыше 23 тысяч награждено орденами и медалями», — сказал генерал-полковник Сергей Бунин.
«В непростое для нашей страны время в связи с обострением обстановки на Северном Кавказе появилась необходимость в эффективной структуре по противодействию терроризму. Такой структурой стала Объединенная группировка войск (сил)», – сказал Сергей Меликов.
Слова благодарности командованию и личному составу ОГВ(с) выразил Рамзан Кадыров. «В годы испытаний для Чеченской Республики мы вместе накапливали боевой опыт, с честью и достоинством выполняли служебно-боевые задачи», – сказал он.
На торжественной церемонии наиболее отличившиеся военнослужащие ОГВ (с) получили государственные и ведомственные награды, а вдове майора Джамбулата Амирарсланова — Айшат Гаджиевне вручены ключи от легкового автомобиля. Майор Джамбулат Амирарсланов погиб в апреле 2013 г. в ходе контртеррористической операции в Республике Ингушетия. Офицер посмертно награжден орденом «За заслуги перед Отечеством» IV степени и навечно зачислен в списки личного состава 49 отдельной бригады оперативного назначения Северо-Кавказского регионального командования внутренних войск МВД России.
Пресс-служба внутренних войск МВД России
ответ | Реформа контрольно-надзорной деятельности
Вопрос-ответ
Коллеги, у кого-нибудь доступна роль Администратор КНО в ЕСИА? Или это не в ЕСИА права раздаются?
Пока доступна только роль (группа) Сотрудник КНО. Остальные группы появятся в самое ближайшее время.
А если наших видов контроля нет в приоритетных?
Необходимо формировать запрос в Минкомсвязи о необходимости использования ТОР КНД в дополнительных видах контроля.
Что такое код? Что такое ОГВ?
Код – код организации в системе. ОГВ – орган государственной власти.
Нормативного акта, устанавливающего категории риска по нашим видам КНД, пока нет. Как нам тогда быть?
Нужно уточнять в Минэк.
А если у нас не используются категории рисков и классы опасностей?
Нужно уточнять в Минэк.
Можно пока вкратце — администратор настраивает в ЛК виды КНД для всего органа, а потом раздает их по сотрудникам?
Администратор КНО настраивает ЛК под виды контроля. Потом в этом ЛК уже работают сотрудники КНО.
Какую роль в системе должен иметь сотрудник для ведения реестра
Сотрудник КНО.
Кто назначает администратора в ЕСИА, руководитель КНО?
Руководитель организации все роли в ЕСИА назначает.
Присоединяюсь к вопросу Ирины Макаровой. Если ежегодный план проверок не формируется, как тогда в системе работать?
Реестры контролируемых субъектов делятся по видам деятельности или все в одну кучу?
Один реестр субъектов всех типов.
А администратор может быть один на несколько огв?
Да, может. Достаточно дать роль сотруднику Администратор КНО в ЕСИА в настройках КНО.
ГРН это ОГРН что ли?
Да.
Подконтрольный субъект, подконтрольный объект, в чем разница
Субъект — владелец объекта.
Все заводимые сведения нужно будет дублировать и на сайте proverki.gov.ru?
После доработки ГИС ЕРП и интеграции с ним ТОР КНД дублировать не потребуется.
Физические лица будут?
Учтем как замечание. Будет рассмотрено.
Организации должны подавать уведомление о начале деятельности. В Реестре Роструда почти
Это вопрос организации процесса регистрации объектов и субъектов в КНО. КАС ООП предполагает, что должностное лицо КНО уже знает ОГРН (или ИНН) субъекта, который должен быть занесен в систему. Мы можем рассмотреть варианты процессов учета уведомлений.
А создавать субъект кто будет ИТ-шники что ли?
Сотрудники КНО.
Добрый день. Скажите, пожалуйста, если орган ведет в своей системе реестр — будет ли возможна интеграция ВИС органа с ТОР для загрузки (и последующего обновления реестров)?
Доступен только импорт/экспорт реестров через csv.
А если организации больше 100 объектов? вручную заводить?
В данный момент доступен импорт/экспорт реестров через csv.
Я так и не понял почему администраторы должны заводить карточки объектов?
Только настройка личного кабинета.
Почему нет опции перенесения всей информации карточки из базы ФНС например по введению ИНН напрямую без всяких межведомственных заявок?
Будет функционал обогащения после полноценной интеграции по межведу с сервисами ФНС.
Почему в тестовой версии нет нормальной связи с адресной базой КЛАДР в тестовой версии адрес определялся только до района и не видел например наш областной центр.
Работа со справочниками, в том числе КЛАДР планируется к реализации.
возможна ли выгрузка из Excel в эту программу?
Поддерживается импорт/экспорт из csv (пока что).
Почему нет связи с Общероссийским классификатором деятельности? Зачем создавать каждый вид заново если вся информация где-то уже внесена, причем с кодами и правильными названиями?
Работа со справочниками, в том числе ОКВЭД планируется к реализации.
ТОР автоматически по заданным критериям не будет распределять поднадзорных субъектов по видам риска и классам опасности?
Функционал будет не ранее 2018 года.
Нужны методические указания для пользователей, демо-версия, и координаты организации, в которую можно направить предложения по доработке системы.
Ссылку на тестовый кабинет и пароль/логин Вы можете запросить у координатора региона. Вопросы можно отправлять на адрес [email protected]. Методические рекомендации выкладываются по мере готовности по адресу https://knd.minsvyaz.ru/vnedrenie/.
Облачное решение позволит подавать запросы в МВД, Росреестр, налоговую и т.д.?
Да, планируется возможность отправки запросов по межведу.
На сегодняшний день очень актуален вопрос по направлению запросов в Росреестр
Планируется возможность отправки запросов по межведу.
Что мне даст заполнение всех этих форм? Будет ли выгружаться отчетная форма 1-контроль? в ЕРП придется вносить все еще раз, или будет автоматически туда скидываться инфа? Что мне это даст, кроме огромной дополнительной работы?
Будет возможность автоматического формирования отчетности и после завершении интеграции с ГАСУ будет реализована отправка формы контроль-1. Аналогично будет реализовано взаимодействие с ЕРП.
А когда можно будет и где распечатать на бумажном носителе руководство пользователя которому нужно будет вносить данные по надзору?
Руководство пользователя по ведению реестров будет подготовлено к 15.06.2017
Обещали при необходимости перенести созданные субъекты проверок из тестовой в рабочую базу. Перенесут данные?
Да, можем перенести созданные субъекты проверок. Необходимо отправить заявку на [email protected].
Коллеги, все же будет ли разработано API для интеграции ВИС и тор в части загрузки и актуализации данных?
На данный момент только через импорт.
Органы жилнадзора размещают информацию о подконтрольных субъектах, истории их проверок в системах ГИС ЖКХ (треб. закона 209-ФЗ) на сайте dom.gosuslugi.ru и на сайте proverki.gov.ru. Возможно ли реализовать для ОГЖН организацию системы учета подконтрольных субъектов, результатов проверок только в ГИС ЖКХ? Либо предусмотреть возможность интегрирования информации из ГИС ЖКХ в ТОР КНД.
Вопрос интеграции с ГИС ЖКХ рассматривается.
где взять логин и пароль для тестовой УЗ
С этим вопросом необходимо обращаться к координатору региона.
в какой срок планируется интеграция с ГИС ЕРП, ФРГУ, ЕПГУ ?
Интеграция с ЕПР планируется. Минкомсвязь готовит предложение по модернизации ЕРП, в рабочих планах срок – 4 квартал 2017.
будет ли возможность импорта реестра подконтрольных объектов из xls
Поддерживается импорт из CSV
Если ТОР будет взаимодействовать с АС ЕРП, то как тогда заносить проверки в рамках государственного строительного надзора? В АС ЕРП размещаются только плановые и внеплановые проверки, а при государственном строительном надзоре ежегодный план не формируется
Для государственного строительного надзора будет реализован и предложен отдельный типовой процесс, который КНО сможет адаптировать под свои требования.
Добрый день. Скажите, пожалуйста, если орган ведет в своей системе реестр – будет ли возможна интеграция ВИС органа с ТОР для загрузки (и последующего обновления реестров)?
Да, интеграцию рассматриваем.
В систему нужно заводить все субъекты проверок, или только проверяемых, по мере проведения проверок?
Только проверяемых.
Планируются ли выходные формы актов, предписаний?
Да, планируются.
За одним и тем же юридическим лицом надзирают сразу несколько КНО, можно ли по ИНН просто добавить объекты в реестр конкретного КНО из базы ФНС со всеми адресами объектов? Спасибо.
Можно добавить субъект в реестр с минимальным кол-вом полей (огрн, инн) и по межведу в скором времени можно будет обогатить данные из ФНС.
Имеется ли нормальный хелп для простого пользователя (без опций программирования и администрирования) и где с ним можно ознакомиться?
Будут предоставлены руководства. По любым вопросом обращайтесь в техподдержку
Администратор КНО, должен создать структуру субъектов и объектов? а Сотрудник КНО должен заносить данные. Почему загрузить может только администратор КНо CSV?
После обновления базы у Сотрудников КНО также будет возможность загружать данные из CSV.
Реестр лицензий на алкоголь ведет РАР, можно ли из данного реестра интегрировать объекты и субъекты, сущности?
Вопрос прорабатывается.
куда заходить, чтобы опробовать программу и где взять пароль и логин?
Необходимо обращаться к координатору в регионе.
Что необходимо чтобы администраторов КНО поменяли на соответствующих специалистов?
Если имеется в виду ролевая модель ТОР КНД, то достаточно изменить группу в ЕСИА.
По алкоголю риски в проекте, как быть в этой ситуации?
Методику по риск-ориентированным показателям должно готовить МИНЭК.
Реестры контролируемых субъектов делятся по видам деятельности или все в одну кучу? — Один реестр субъектов всех типов — а будет ли разграничение доступа к реестру в зависимости от вида деятельности ?
Пока нет, но технически можно организовать.
Будет ли реализовано МВ — взаимодействие в соответствии с утвержденными ТКМВ для 7 приоритетных видов КНД? в какой срок?
Будет, до сентября.
______________________________
Дата изменения: 12.03.2018 17:53
Новый командующий объединенной группировкой войск (сил) на Северном Кавказе представлен личному составу
13.03.2019 15:18
Первый заместитель директора Федеральной службы войск национальной гвардии РФ генерал-полковник Сергей Меликов в ходе рабочей поездки в Северо-Кавказский округ представил нового командующего Объединенной группировкой войск (сил) на Северном Кавказе генерал-лейтенанта Василия Федорука.
На служебном совещании с участием командования ОГВ(с) и руководителей взаимодействующих силовых структур и правоохранительных органов Сергей Меликов подчеркнул, что Василий Федорук имеет большой опыт боевой работы и участия в контртеррористических операциях на Северном Кавказе.
«Надеюсь, что Василий Александрович в своей работе продолжит традиции и принципы, которые были заложены в ОГВ(с), и, конечно, выстроит работу таким образом, чтобы применение сил и средств группировки было направлено на дальнейшую стабилизацию обстановки в Северо-Кавказском регионе», — сказал генерал-полковник С. Меликов.
В должности командующего ОГВ(с) генерал-лейтенант В.Федорук сменил генерал-лейтенанта Игоря Семиляка, который Указом Президента РФ назначен начальником Главного управления сил специального назначения Федеральной службы войск национальной гвардии Российской Федерации.
Первый заместитель директора Росгвардии отметил, что все задачи ОГВ(с) под руководством Игоря Семиляка были своевременно и качественно выполнены.
Объединенная группировка войск (сил) на Северном Кавказе уже на протяжении 20 лет остаётся основным силовым инструментом по противодействию терроризму и обеспечению правопорядка и стабильности, сообщили ИА «Грозный-информ» в пресс-служба Управления Росгвардии по ЧР .
«Ключевое слово в названии группировки – «объединенная». Этот пункт управления объединяет усилия всех силовых структур, органов исполнительной власти и местного самоуправления для обеспечения безопасности и правопорядка в регионе», — обратил внимание первый заместитель директора Росгвардии.
Сергей Меликов поздравил генерал-лейтенантов Игоря Семиляка и Василия Федорука с назначением и пожелал им дальнейших успехов в службе на новых должностях. Завершая служебное совещание, он вручил ведомственные награды отличившимся военнослужащим и сотрудникам Росгвардии.
Все права защищены. При перепечатке ссылка на сайт ИА «Грозный-информ» обязательна.
Нашли ошибку в тексте? Выделите ее мышкой и нажмите: Ctrl+Enter
что єто такое и как его выбрать?
Автор Михаил Стахов На чтение 4 мин. Просмотров 35.5k. Опубликовано
Прочитав фразу: «Как выбрать АГВ отопление?», неподготовленный человек «поселит» в своих мыслях вопрос: «А что это такое АГВ отопление?»
АГВ расшифровывается, как автономный газовый водонагреватель. Иными словами это газовый котел, предназначенный для отопления и горячего водоснабжения. За последние десятилетия они серьезно видоизменились, улучшили параметры своей эффективности и экономичности. Мы не будем «залазить» в историю, а остановимся на основных нюансах подбора газового котла для Вашего дома или офиса.
Для правильного выбора такого устройства желательно обратиться к квалифицированному специалисту. Однако иметь базовые знания в этой теме заказчику, отнюдь, не помешает, дабы помешать «нерадивому» продавцу продать Вам то, что Вам не нужно или не просто не подойдет.
Современный АГВАГВ старого образца производства СССРОсновные вопросы, ответ на которые Вам необходим для правильного выбора АГВ:
- Какая площадь будет отапливаться данным котлом?
- Какой вариант котла Вам подойдет?
- Какие материалы будут использованы в отопительной системе дома?
- В отопительной системе какого типа будет работать данный АГВ?
Ответ на первый вопрос, который должен Вам задать квалифицированный продавец, определяет необходимую мощность котла.
Точное значение площади обогреваемого помещения позволит продавцу подобрать оптимальный вариант АГВ, что позволит вам «быть в тепле» и не переплачивать.
Стандартный ряд мощностей АГВ выглядит так:
11,6 кВт, 16 кВт, 17,4 кВт, 23,2 кВт, 29 кВт, 35 кВт и т.д.
В техническом паспорте указана максимальная мощность котла. На практике необходимо учитывать теплопотери помещения, снижения давления газа в трубопроводе при чрезмерной нагрузке на него в период сильных морозов и пр.
Для хорошо утепленного помещения площадью 100 м2 и высотой потолка до 2,8 м достаточно будет АГВ мощностью 11,6 кВт. Расчет делается из соотношения 1кВт мощности котла на 10м2 площади помещения при условии его качественной теплоизоляции.
Внимание! При наличии в помещении теплопотерь или высоких (более 2,8 м) потолков, желательно брать котел более мощный (хотя бы на 25%, в нашем примере 16 кВт).
Ответ на второй вопрос относительно типа котла формируется из Ваших к нему функциональных «требований»:
- Котел будет висеть на стене (настенный) или стоять на полу или специальном постаменте (напольный вариант)?
- Котел будет одноконтурным (только для системы отопления) или двухконтурным (для отопления и горячего водоснабжения).
Ответ на третий вопрос не менее важен и дополняет первый, так как материалы системы отопления, точнее, их параметры, влияют на требуемую мощность котла.
Например, конденсационный котел с высоким коэффициентом полезного действия (КПД) «тратит» 1 кВт своей мощности на нагревание 12-14 л воды системы отопления. И если Вы не в состоянии самостоятельно определить объем воды в отопительной системе — скажите продавцу, какие теплоизлучающие элементы вы используете (труба, регистр, радиатор).
Внимание! На заданный продавцом такой вопрос может свидетельствовать о некомпетентности данного представителя торговой индустрии или, в лучшем случае о его невнимательности — отчего Вам легче не будет. Возможно, для Вас выгоднее буде поискать иную торговую точку.
В чем опасность? Часто система имеет больший объем воды, чем может нормально прогреть котел. Поэтому температура воды в системе может не подниматься выше определенного значения, например 50-60 оС. А этого может мыть недостаточно для эффективного обогрева помещения.
Ответ на четвертый вопрос подразумевает принятие во внимание такого параметра котла, как его максимальное избыточное давление. Если котел будет работать в системе отопления «закрытого» типа, где присутствует значительное избыточное давление, то указанное в его паспорте максимальное избыточное давление не должно быть меньше рабочего.
Внимание! Современные АГВ серьезно «напичканы» электроникой, которая может пострадать от резких скачков напряжения сети электропитания. Поэтому целесообразно при решении вопроса выбора АГВ отопления задуматься о приобретении стабилизатора напряжения.
Для дифференцированного регулирования температуры в различных помещениях желательно на все радиаторы поставить регулирующую термоголовку.
Надеемся, что материалы этой статьи помогут Вам не выглядеть «белой вороной» рядом с «грамотным» продавцом, а будут способствовать продуктивному диалогу с ним.
Как правильно выбрать газовый котел?
РЕД СОФТ | Федеральная служба судебных приставов
Федеральная служба судебных приставов (ФССП России) является федеральным органом исполнительной власти, осуществляющим функции по обеспечению установленного порядка деятельности судов, исполнению судебных актов, актов других органов и должностных лиц, а также правоприменительные функции и функции по контролю и надзору в установленной сфере деятельности.
АИС ФССП России — Автоматизированная информационная система Федеральной службы судебных приставов России
АИС ФССП России является комплексной территориально-распределённой информационной системой, разработанной на основе свободного программного обеспечения, и в настоящее время функционирует в более чем 2 800 отделах судебных приставов. На территориальном и федеральном уровне внедрены центральные базы данных, на основе которых выполняется контроль за ходом ведомственных процессов ФССП России.
В центральном аппарате ФССП России развернуты подсистемы, обеспечивающие документооборот в части ведения нормативно-справочной информации, обеспечения межведомственного взаимодействия, работы внутреннего портала.
В федеральной центральной базе данных имеются сведения о более чем 198 миллионах исполнительных производств и более чем 5,2 млрд карточек документов.
Ежедневно системой АИС ФССП России пользуются более 80 000 сотрудников и более 100 контрагентов (администраторы доходов бюджета, ОГВ субъектов РФ, кредитные организации, операторы связи и др.).
Центральный сервер межведомственного электронного взаимодействия ФССП России обеспечивает в периоды пиковой нагрузки выполнение более 130 млн операций в сутки.
АИС ФССП России в части программного обеспечения имеет высокую степень технологической независимости с заданным уровнем обеспечения безопасности:
- операционная система – GosLinux;
- система программирования – GCC, OpenJDK, IntelliJIDEA;
- СУБД – Ред База Данных 2.5;
- сервер приложений – Ред Платформа;
- комплекс библиотек программ – адаптированные библиотеки программ с открытым кодом.
АИС ФССП России включает в себя следующие компоненты:
- Подсистема централизованного ведения и распространения нормативно-справочной информации (Подсистема НСИ) АИС ФССП России;
- Подсистема технологического мониторинга и администрирования (Подсистема ТМА) АИС ФССП России;
- Подсистема гарантированной доставки (Подсистема ГД) АИС ФССП России;
- Программный комплекс отдела судебных приставов (ПК ОСП) АИС ФССП России;
- Подсистема ведомственного статистического учета (Подсистема ВС) АИС ФССП России;
- Подсистема оперативного мониторинга и анализа информации (Подсистема ВА) АИС ФССП России на базе центральной и региональных баз данных;
- Подсистема межведомственного взаимодействия (Подсистема МВВ) АИС ФССП России;
- Ведомственная система электронной почты АИС ФССП России;
- Подсистема электронного документооборота (Подсистема ЭД) АИС ФССП России;
- Ведомственный служебный портал АИС ФССП России.
Подсистема ГД, Подсистема ТМА, ПК ОСП, Подсистема ВС, Подсистема ВА, Подсистема МВВ, Подсистема НСИ, Подсистема ЭД, Ведомственный служебный портал являются различными конфигурациями единой технологической платформы подсистем АИС ФССП России.
Информация о регистрации ФГИС:
Реестровый номер: 0133
Номер и дата выдачи электронного паспорта: ФС-77110133 от 08.09.2011
Ссылка на реестр: http://rkn.gov.ru/it/register/?id=101853
OGWs: 1814 Leeds, Bastard Twp
1814 Bastard Twp, LeedsCopyright (c) 2007, Brian Haskin, OntarioGenWeb’s Census Project (http://oncensus.canadagenweb.org)
Расшифровщик: Брайан Хаскин
Корректор: нужен корректор
LAC № MS-2547
LDS # unknown
Район: Район Джонстаун
Субрайон: Городок ублюдков
Перечислитель: День Иеремии
Что означают заголовки?
LN | LAST_NAME | FIRST_NAME | # MM_16-50 | # MS_16-50 | # M_50-60 | # M_60 + | #F | # M_0-16 | #FC |
1 | Килберн | Самуэль | 1 | 1 | 2 | 4 | |||
2 | Килберн | Бенджамин | 1 | ||||||
3 | Макколлум | Итан | 1 | 4 | 4 | ||||
4 | Чапин | Абнер | 1 | 1 | 2 | 4 | |||
5 | Абель | Уильям | 1 | 1 | 4 | 2 | |||
6 | Абель | Лиман | 1 | ||||||
7 | Стивенс | Уильям | 1 | 1 | 3 | 5 | |||
8 | Кнап | Ithemer | 1 | 1 | 4 | 3 | |||
9 | Чадский | Елисей | 1 | 1 | |||||
10 | Кнап | Кэри | 1 | 1 | 3 | ||||
11 | Чайка | Генри | 1 | ||||||
12 | Йейтс | Ханна | 1 | 1 | |||||
13 | Шелдон | Самуэль | 1 | 1 | 1 | 1 | |||
14 | Шелдон | Рубен А. | 1 | ||||||
15 | Шелдон | Гарри | 1 | ||||||
16 | Benadict | Джозеф | 1 | 1 | 3 | ||||
17 | Benadict | Иоанна | 1 | ||||||
18 | Benadict | Ездра | 1 | 1 | 1 | 4 | |||
19 | Benadict | Исаак | 1 | ||||||
20 | Burgess | Джозайя Д. | 1 | 1 | 4 | ||||
21 | Burgess | Иоанна | 1 | ||||||
22 | Burgess | Немецкий | 1 | ||||||
23 | Буллард | Иосия > | 1 | 1 | 2 | 2 | |||
24 | Приход | Элиада | 1 | 1 | 3 | 6 | |||
25 | Чипман | Варнава | 1 | 1 | 2 | 1 | |||
26 | Чипман | Элан | 1 | ||||||
27 | Сараи | Иоанна | 1 | 1 | 3 | 2 | |||
28 | Барнс | Джон мл. | 1 | ||||||
29 | Барнс | Ансель | 1 | ||||||
30 | Богет | Гашум | 1 | 1 | 2 | 1 | |||
31 | Рамент | Трумэн | 1 | 1 | 2 | 1 | |||
32 | Йейтс | Филип | 1 | ||||||
33 | Гилберт | Илия | 1 | 1 | 1 | 1 | |||
34 | Tuhi | Иоанна | 1 | 1 | 1 | ||||
35 | Фрейзер | Иеремия | 1 | 1 | 3 | 3 | |||
36 | Фрейзер | Коллинз | 1 | ||||||
37 | Стивенс | Даниил | 1 | 1 | 2 | 3 | |||
38 | Тит | Уильям | 1 | 1 | 3 | 3 | |||
39 | Knowlton | Томас | 1 | 1 | 1 | 3 | |||
40 | Смит | Сайлас | 1 | 1 | 1 | ||||
41 | Николс | Кларк | 1 | 1 | 4 | 2 | |||
42 | Николс | Давид | 1 | 1 | 2 | ||||
43 | Макколлум | Benadict | 1 | 1 | 2 | 2 | |||
44 | Викори | Томас | 1 | 1 | 2 | 2 | |||
45 | Гилмор | Иоанна | 1 | 1 | 4 | 1 | |||
46 | Wakely | Натан | 1 | 1 | 7 | ||||
47 | Смит | Асаэль | 1 | 1 | 2 | ||||
48 | Стодард | Икабод | 1 | 1 | 1 | 1 | |||
49 | Стодард | Арвен | 1 | ||||||
50 | Стодард | Лиман | 1 | ||||||
51 | Eperson | Джордж | 1 | 1 | 2 | 2 | |||
52 | Eperson | Иисуса Навина | 1 | ||||||
53 | Стивенс | Генри | 1 | 1 | 1 | 2 | |||
54 | Борден | Тимофею | 1 | 1 | 1 | 2 | |||
55 | Рэтбоун | Иосия | 1 | 1 | 3 | 2 | |||
56 | Николс | Шелдон | 1 | 1 | 2 | ||||
57 | Снайдер | Мэтью | 1 | 1 | 1 | 1 | |||
58 | Dicson | Нетаниэль | 1 | 1 | 3 | ||||
59 | Чемберлен | Элиас | 1 | 1 | 3 | ||||
60 | Джадд | Арза | 1 | 1 | 2 | 2 | |||
61 | Джадд | Арза-младший | 1 | ||||||
62 | Джадд | Томас | 1 | 1 | |||||
63 | Альфред | Амхерст | 1 | 1 | 3 | ||||
64 | Чипман | Вдова | 1 | 1 | 1 | ||||
65 | Чипман | Исаак | 1 | 1 | 1 | ||||
66 | Чипман | Генри | 1 (?) | ||||||
67 | Чипман | Трумэн | 1 | ||||||
68 | французский | Чарльз | 1 | 1 | 4 | ||||
69 | Чемберлен | Илия | 1 | 1 | 2 | 1 | |||
70 | Родос | Jebes | 1 | 1 | 3 | ||||
71 | День | Ричард | 1 | 1 | 5 | ||||
72 | Планка | Аса | 1 (?) | ||||||
73 | Оболочка (?) | Патрик | 1 | ||||||
74 | Шелден | Иеремия | 1 | 1 | 4 | 2 | |||
75 | Шелден | Гораций | 1 | ||||||
76 | переулок (индекс | )Самуэль | 1 | 1 | 4 | 1 | |||
77 | переулок (индекс | )Бенджамин | 1 | ||||||
78 | Паром | Даниил | 1 | 1 | 3 | 3 | |||
79 | Брэкенридж | Джордж | 1 | 1 | 2 | ||||
80 | Уорнер | Сет | 1 | 1 | 3 | 4 | |||
81 | коричневый | Томпсон | 1 | ||||||
82 | Bresee | Николай | 1 | 1 | 3 | 2 | |||
83 | Сазерленд | Немецкий | 1 | 1 | 5 | ||||
84 | Bresee | Питер | 1 | 1 | 5 | 3 | |||
85 | Стивенс | Абель-младший | 1 | 3 | 3 | ||||
86 | Стивенс | Исаак | 1 | ||||||
87 | Стивенс | Абель > | 1 | 1 | 1 | ||||
88 | Стивенс | Альфред | 1 | ||||||
89 | Стивенс | Элиху | 1 | ||||||
90 | Кертис | Джоних | 1 | 1 | |||||
91 | Сойер | Филип | 1 | 1 | 3 | 2 | |||
92 | Роберсон | Иоанна | 1 | 1 | 6 | ||||
93 | Роберсон | Уильям | 1 | ||||||
94 | Шерман | Принц | 1 | ||||||
95 | Втулка | Уильям | 1 | 1 | 3 | 4 | |||
96 | Втулка | Уильям мл. | 1 | ||||||
97 | Шамвей | Фрэнсис | 1 | 1 | 1 | ||||
98 | Шамвей | Бенджамин | 1 | 1 | 1 | 1 | |||
99 | Метис | Николай | 1 | 1 | 1 | 3 | |||
100 | Макниш | Уильям | 1 | ||||||
101 | Скофилд | Ира | 1 | 1 | 4 | 2 | |||
102 | Адамс | Иисуса Навина | 1 | 1 | 5 | 1 | |||
103 | Латунь | Иоанна | 1 | 1 | |||||
104 | Лауренс | Вдова | 1 | 1 | 6 | ||||
105 | Hartwell | Питер | 1 | 1 | 1 | 3 | |||
106 | Hartwell | Эбенезер | 1 | ||||||
107 | Hartwell | Джеймс | 1 | ||||||
108 | Рэндол | Мэтью | 1 | 1 | 1 | ||||
109 | Джонс | Давид | 1 | ||||||
110 | коричневый | Генри | 1 | 1 | |||||
111 | коричневый | Давид | 1 | ||||||
112 | поясничный | Фрэнсис | 1 | 1 | 2 | 6 | |||
113 | Lackway | Фрэнсис | 1 | 1 | 1 | ||||
114 | Фарнум | Архелус | 1 | 1 | 2 | 1 | |||
115 | Фелпс | Даниил | 1 | 1 | 1 | 2 | |||
116 | Фелпс | Уильям | 1 | 1 | 1 | ||||
117 | Джонс | Asa | 1 | 1 | 1 | ||||
118 | Дэвисон | Роберт | 1 | 1 | 3 | 5 | |||
119 | Стивенс | Джонатан | 1 | 1 | 3 | 2 | |||
120 | Скофилд | Джеймс | 1 | 1 | 1 | 1 | |||
121 | Бэтчелор | Вдова | 1 | 3 | 1 | ||||
122 | Бэтчелор | Симеон | 1 | ||||||
123 | Бэтчелор | Asa | 1 | ||||||
124 | Бэтчелор | Альфред | 1 | ||||||
125 | Купер | Вт. | 1 | 1 | 1 | 2 | |||
126 | Gyle | Амос | 1 | 1 | 2 | ||||
127 | Кетчум | Иоанна | 1 | 1 | 5 | 1 | |||
128 | Делонг | Джордж | 1 | 1 | 1 | 2 | |||
129 | Лауренс | Роберт | 1 | 1 | 1 | 2 | |||
130 | Лауренс | Ричард | 1 | ||||||
131 | Джексон | Вдова | 1 | 2 | 2 | ||||
132 | Джексон | Ефрем | 1 | ||||||
133 | Фарнум | Иоанна | 1 | 1 | 1 | 3 | |||
134 | Фарнум | Лиман | 1 | ||||||
135 | Элсворт | Исреал | 1 | 1 | 1 | 2 | |||
136 | Стивенс | Джонатан младший | 1 | 1 | 2 | ||||
137 | Марвин | Кальвин | 1 | 1 | 5 | 1 | |||
138 | Ли | Зенус | 1 | 1 | 1 | ||||
139 | Линси | Ефрем | 1 | 1 | 8 | ||||
140 | Линси | Томас | 1 | ||||||
141 | Линси | Вт. | 1 | ||||||
142 | Bresee | Питер младший | 1 | ||||||
143 | Bresee | Вт. | 1 | ||||||
144 | Мосье | Джозеф | 1 | 1 | 1 | 1 | |||
145 | Дерево | Иоанна | 1 | 1 | 2 | 6 | |||
146 | Дерево | Амос | 1 | ||||||
147 | Моряк | Калеб | 1 | 1 | 3 | 2 | |||
148 | Абернати | Томас | 1 | 1 | 3 | 2 | |||
149 | Смит | Тимофею | 1 | 1 | 1 | ||||
150 | День | Иеремия | 1 | 1 | 3 | 4 | |||
151 | День | Люк Ф. | 1 | ||||||
Ozark Gateway Realty, OGW LLC
Наши обязательства
Мы стремимся предоставить доступный веб-сайт. Если у вас возникли проблемы с доступом к содержимому, возникли проблемы с просмотром файла на сайте или вы заметили какие-либо проблемы с доступностью, свяжитесь с нами, чтобы указать характер проблемы со специальными возможностями и вспомогательные технологии, которые вы используете.Мы постараемся предоставить вам необходимый контент в нужном вам формате. Мы приветствуем ваши предложения и комментарии об улучшении текущих усилий по повышению доступности этого веб-сайта.
Справка по специальным возможностям в Интернете
Есть действия, которые вы можете предпринять, чтобы настроить свой веб-браузер, чтобы сделать вашу работу в сети более доступной.
Я слепой или плохо вижу
Если у вас проблемы с просмотром веб-страниц, Управление социального обеспечения США предлагает эти советы по оптимизации вашего компьютера и браузера, чтобы улучшить ваше взаимодействие с Интернетом.
- Используйте компьютер для чтения веб-страниц вслух
- Используйте клавиатуру для навигации по экранам
- Увеличить размер текста
- Увеличьте экран
- Изменить цвет фона и текста
- Сделайте указатель мыши более заметным (только Windows)
Мне сложно использовать клавиатуру или мышь
Если вам сложно пользоваться клавиатурой или мышью, программное обеспечение для распознавания речи, такое как Dragon® NaturallySpeaking, может помочь вам перемещаться по веб-страницам и онлайн-сервисам.Это программное обеспечение позволяет пользователю перемещать фокус по веб-странице или экрану приложения с помощью голосового управления.
Я глухой или слабослышащий
Если вы глухой или слабослышащий, вам доступны несколько специальных возможностей.
- Расшифровка стенограммы: Текстовая стенограмма — это текстовый эквивалент аудиоинформации, который включает произносимые слова и неречевые звуки, такие как звуковые эффекты.
- Подпись: Подпись — это расшифровка звуковой дорожки видеопрезентации, которая синхронизируется с видео- и аудиодорожками.Субтитры обычно визуализируются путем наложения на видео, что приносит пользу глухим и слабослышащим людям, а также всем, кто не слышит звук (например, в переполненном помещении). Узнайте, как включать и отключать субтитры на YouTube.
- Регуляторы громкости: ваш компьютер, планшет или мобильное устройство имеет функции регулировки громкости. Каждый видео- и аудио-сервис имеет дополнительные регуляторы громкости. Попробуйте отрегулировать как регуляторы громкости вашего устройства, так и регуляторы громкости ваших медиаплееров, чтобы улучшить качество прослушивания.
Для дополнительной помощи
Отправьте электронное письмо на адрес [email protected], если у вас возникнут трудности с доступом к какой-либо части этого веб-сайта, и мы будем работать с вами, чтобы предоставить информацию, товар или транзакцию, которые вы ищете, с помощью альтернативного метода связи, доступного для вас в соответствии с действующим законодательством. .
Workshop Teamleiders OGW en sturen op OGW.
Презентация завершена: «Workshop Teamleiders OGW en sturen op OGW.»- Transcript van de presentatie:
ins [data-ad-slot = «4502451947»] {display: none! important;}} @media (max-width: 800px) {# place_14> ins: not ([data-ad-slot = «4502451947»]) {display: none! important;}} @media (max-width: 800px) {# place_14 {width: 250px;}} @media (max-width: 500 пикселей) {# place_14 {width: 120px;}} ]]>1 Мастерская Teamleiders OGW en sturen op OGW
2 Opbouw Workshop Opbrengstgericht werken in context
Theorie naar Juliette Vermaas Visie school: vertaalslag naar opbrengsten Sturen op opbrengsten, een opbrengstgerichte cultuur: what betekent dat voor onszelf?
3 Ватт — это OGW? Opbrengstgericht werken is het: systematisch en
doelgericht werken aan het maximaliseren van de onderwijsprestaties waarbij all betrokkenen zich laten sturen door de uitkomsten van verschillende prestatiemetingen opomen opomenactivities en der.
4 Doel OGW Niet Alleen Richten op prestaties (terugkijken), maar resultaten analyseren en gebruiken om vooruit te kijken: Hogere verwachtingen / doelen stellen. Обратная связь geven. Gebruik van metingen om ontwikkelingen te volgen van leerling / docent. Последствия verbinden aan de analysis: bijsturen / verbeteren. Hierdoor bijdrage leveren aan school-ontwikkeling en verantwoording: Gerealiseerde leerwinst inzichtelijk maken.Beter onderbouwde verantwoording над эффектом воды находится в классическом стиле.
5 Самен OGW Het verhogen van opbrengsten vraagt om vooruit kijken, doelen stellen en op base daarvan onderwijs beter inrichten. Daarvoor moet je fasalde resultaten analyseren en интерпретатор. OGW biedt hiervoor een systematische aanpak. OGW vraagt gezamenlijke verantwoordelijkheid en betrokkenheid van: Leerlingen en ouders Docenten Teamleiders Schoolleiding Kwaliteitszorgmedewerkers
6 Зес Бувстенен ван ОГВ
7 Хиервур кивает: Planmatige aanpak Een opbrengstgerichte cultuur
8 Planmatige aanpak План: Samen niet-onderhandelbare doelen vaststellen en обширная легкая в результате (wat ga je bereiken, hoe ga je dat meten, wanneer is het resultaat bereikt?)
9 Opbrengstgericht cultuur
Hoge doelen en verwachtingen van jezelf en van elkaar.Structureel analyseren. Вербетерен: акти! Откройте для себя культуру для отражения и обратной связи.
10 Мотивация
11 Visie van de school Hier wordt de visie van de school in beeld gebracht. Het liefst terug gebracht naar 1 из 2 dias. Geef de kerngebieden van de visie aan waarop je als school de opbrengsten hebt gedefinieerd en wat de opbrengsten zijn.
12 Opdracht 1. Kijk naar de kernbegrippen uit de visie.
Dit leidt tot opbrengsten voor de leerling. Hoe zou je die opbrengsten Definiëren? Geef per opbrengst aan bij welk kernbegrip (pen) deze hoort. Schrijf de opbrengsten met een viltstift op geeltjes. Eén opbrengst per geeltje. Zie ook: Werkvorm visie koppelen aan opbrengsten leerlingen
13 Opdracht 2 Opbrengstgericht werken vraagt om een cultuur in de school waarin je elkaar aan kunt spreken op resultaten die je samen hebt hugegesteld.Beschrijf встретил elkaar в drie regels de cultuur in het docentencorps zoals jij die nu ziet. Бешрайф встретил Элькаара в школе drie regels de cultuur van het sturen binnen jullie school. Benoem voorbeelden / situaties waarin jullie als leidinggevenden al sturen op afgesproken resultaten. Benoem voorbeelden / situaties waarin jullie nog niet sturen op afgesproken resultaten. Zie ook Werkvorm Cultuur en sturen.
14 Opdracht 3 Kies een van de voorbeelden / situaties waarin jullie als MT of afdelingsleiding nog niet sturen op resultaten.Beschrijf de situatie zo nauwkeurig mogelijk en beschrijf ook het gedrag dat jullie nu vertonen. Beschrijf vervolgens het gedrag zoals jullie dat in een meer opbrengstgerichte cultuur zouden Willen Vertonen. Wat Doe Je Anders? Wat zeg je anders? Wat straal je uit? Verfilm Vervolgens перед сценами. Zie ook Werkvorm In de klas gedrag docent. Werkvorm gelijk, opdracht andere inhoud.
MIR-NAT репрессируют трансляцию MAPT и способствуют протеостазу при нейродегенерации
Пелехано В. и Стейнмец Л. М. Регулирование генов с помощью антисмысловой транскрипции. Нат. Преподобный Genet . 14 , 880–893 (2013).
CAS PubMed Google ученый
Statello, L., Guo, C.-J., Chen, L.-L. & Huarte, M. Регуляция генов с помощью длинных некодирующих РНК и их биологические функции. Нат. Rev. Mol. Ячейка Биол . 22 , 96–118 (2021).
CAS PubMed Google ученый
Veo, B. L. & Krushel, L.A. Вторичная структура РНК и нуклеотидная специфичность вносят вклад во внутреннюю инициацию, опосредованную 5′-лидером тау-белка человека. РНК Биол . 9 , 1344–1360 (2012).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Спиллантини, М. Г. и Гёдерт, М. Тау патология и нейродегенерация. Ланцет Нейрол . 12 , 609–622 (2013).
CAS PubMed Google ученый
Pittman, A. M. et al. Точное картирование неравновесного сцепления и анализ ассоциации гаплотипов гена тау при прогрессирующем надъядерном параличе и кортикобазальной дегенерации. J. Med. Genet . 42 , 837–846 (2005).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Gsponer, J., Futschik, M. E., Teichmann, S. A. & Babu, M. M. Жесткое регулирование неструктурированных белков: от синтеза транскриптов до деградации белков. Наука 322 , 1365–1368 (2008).
ADS CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Zucchelli, S. et al. Антисмысловая транскрипция в локусах, связанных с наследственными нейродегенеративными заболеваниями. Мол. Нейробиол . 56 , 5392–5415 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Sibley, C.R. et al. Рекурсивный сплайсинг в генах длинных позвоночных. Природа 521 , 371–375 (2015).
ADS CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Miller, J. A. et al. Невропатологические и транскриптомные характеристики головного мозга в возрасте. eLife 6 , e31126 (2017).
PubMed PubMed Central Google ученый
Bennett, D.A. et al. Религиозные ордена изучают и ускоряют проект памяти и старения. J. Alzheimers Dis . 64 (s1), S161 – S189 (2018).
PubMed PubMed Central Google ученый
Coupland, K. G. et al. Роль длинной некодирующей РНК MAPT-AS1 в регуляции экспрессии белка тау, ассоциированного с микротрубочками ( MAPT ), при болезни Паркинсона. PLoS ONE 11 , e0157924 (2016).
PubMed PubMed Central Google ученый
Elkouris, M. et al. У пациентов с болезнью Паркинсона снижено количество длинных некодирующих РНК, связанных с генами, связанными с нейродегенерацией. Фронт. Клетка. Neurosci . 13 , 58 (2019).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Smit, A. F. & Riggs, A. D. MIR — это классические SINE, происходящие от тРНК, которые амплифицируются до облучения млекопитающих. Nucleic Acids Res . 23 , 98–102 (1995).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Gilbert, N. & Labuda, D. CORE-SINEs: эукариотические короткие перемежающиеся ретропозирующие элементы с общими мотивами последовательностей. Proc. Natl Acad. Sci. США 96 , 2869–2874 (1999).
ADS CAS PubMed Google ученый
Lander, E. S. et al. Начальная последовательность и анализ человеческого генома. Природа 409 , 860–921 (2001).
ADS CAS PubMed Google ученый
Morita, T. и Sobue, K. Спецификация нейрональной полярности, регулируемой локальной трансляцией CRMP2 и Tau через путь mTOR – p70S6K. J. Biol. Chem . 284 , 27734–27745 (2009).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Бутли, А., Филлипс, Н. М., Уэбб, Т. Е., Уиллис, А. Э. и Сприггс, К. А. Ингибирование eIF4A позволяет регулировать трансляцию мРНК, кодирующих белки, участвующие в болезни Альцгеймера. PLoS ONE 5 , e13030 (2010 г.).
ADS PubMed PubMed Central Google ученый
Мауро В. П. и Эдельман Г. М. Гипотеза рибосомного фильтра. Proc. Natl Acad. Sci. США 99 , 12031–12036 (2002).
ADS CAS PubMed Google ученый
Andorfer, C. et al. Гиперфосфорилирование и агрегация тау у мышей, экспрессирующих нормальные изоформы тау человека. Дж. Нейрохим . 86 , 582–590 (2003).
CAS PubMed Google ученый
Nalls, M. A. et al. Масштабный мета-анализ данных ассоциации по всему геному выявил шесть новых локусов риска болезни Паркинсона. Нат. Genet . 46 , 989–993 (2014).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Hon, C.-C. и другие. Атлас длинных некодирующих РНК человека с точными 5′-концами. Природа 543 , 199–204 (2017).
ADS CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Kapusta, A. et al. Мобильные элементы вносят основной вклад в происхождение, диверсификацию и регуляцию длинных некодирующих РНК позвоночных. PLoS Genet . 9 , e1003470 (2013).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Holcik, M. в Оксфордское руководство по синтезу нейронных белков (изд. Sossin, W. S.) (Oxford Univ. Press, 2018).
Weingarten-Gabbay, S. et al. Сравнительная генетика. Систематическое открытие кэп-независимых последовательностей трансляции в геномах человека и вирусов. Наука 351 , aad4939 (2016).
PubMed Google ученый
Paek, K. Y. et al. Инициирование трансляции опосредовано зацикливанием РНК. Proc. Natl Acad. Sci. США 112 , 1041–1046 (2015).
ADS CAS PubMed Google ученый
Mathys, H. et al. Транскриптомный анализ отдельных клеток болезни Альцгеймера. Природа 570 , 332–337 (2019).
ADS CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Grubman, A. et al. Одноклеточный атлас энторинальной коры людей с болезнью Альцгеймера показывает регуляцию экспрессии генов, специфичную для клеточного типа. Нат. Neurosci . 22 , 2087–2097 (2019).
CAS PubMed Google ученый
Фридман, Б.А.и другие. Разнообразные профили экспрессии миелоида в головном мозге выявляют различные состояния активации микроглии и аспекты болезни Альцгеймера, не очевидные на моделях мышей. Cell Rep . 22 , 832–847 (2018).
CAS PubMed Google ученый
Tomkins, J. E. et al. PINOT: интуитивно понятный ресурс для интеграции белок-белковых взаимодействий. Cell Commun. Сигнал . 18 , 92 (2020).
PubMed PubMed Central Google ученый
Oates, M. E. et al. D 2 P 2 : база данных предсказаний неупорядоченного белка. Nucleic Acids Res . 41 , D508 – D516 (2013).
CAS PubMed Google ученый
Сириам П., Тарталья Г. Г., Моримото Р. И., Добсон С. М. и Вендрусколо М. С перенасыщенными белками связаны широко распространенные агрегационные и нейродегенеративные заболевания. Cell Rep . 5 , 781–790 (2013).
CAS PubMed Google ученый
Эдвардс, Ю. Дж. К., Лобли, А. Е., Пентони, М. М. и Джонс, Д. Т. Понимание регуляции внутренне неупорядоченных белков в протеоме человека путем анализа данных о последовательности и экспрессии генов. Биология генома . 10 , R50 (2009 г.).
PubMed PubMed Central Google ученый
Sposito, T. et al. Регуляция развития сплайсинга тау нарушается в нейронах, происходящих из стволовых клеток от пациентов с лобно-височной деменцией, с мутацией сайта сплайсинга 10 + 16 в MAPT. Гум. Мол. Genet . 24 , 5260–5269 (2015).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Shi, Y., Kirwan, P. & Livesey, F. J. Направлял дифференцировку плюрипотентных стволовых клеток человека в нейроны коры головного мозга и нейронные сети. Нат. Протокол . 7 , 1836–1846 (2012).
CAS PubMed Google ученый
Hall, C.E. et al. Прогрессирующая патология двигательных нейронов и роль астроцитов в модели стволовых клеток человека с БАС, связанным с VCP. Cell Rep . 19 , 1739–1749 (2017).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Де Пальма, М.& Naldini, L. Трансдукция кассеты экспрессии гена с использованием лентивирусных векторов усовершенствованного поколения. Методы Энзимол . 346 , 514–529 (2002).
PubMed Google ученый
Катнер, Р. Х., Чжан, X.-Y. & Reiser, J. Производство, концентрация и титрование лентивирусных векторов на основе псевдотипа ВИЧ-1. Нат. Протокол . 4 , 495–505 (2009).
CAS PubMed Google ученый
Паксинос, Г. и Франклин, К. Мозг мыши в стереотаксических координатах (Academic, 2004).
Kopec, A. M., Rivera, P. D., Lacagnina, M. J., Hanamsagar, R. & Bilbo, S. D. Оптимизированная солюбилизация белка, осажденного TRIzol, позволяет проводить вестерн-блоттинг-анализ для максимизации данных, доступных из ткани мозга. J. Neurosci. Методы 280 , 64–76 (2017).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Schindelin, J. et al. Фиджи: платформа с открытым исходным кодом для анализа биологических изображений. Нат. Методы 9 , 676–682 (2012).
CAS Статья Google ученый
Potter, C.J. и Luo, L. Splinkerette PCR для картирования мобильных элементов в Drosophila . PLoS ONE 5 , e10168 (2010).
ADS PubMed PubMed Central Google ученый
Trabzuni, D. et al. Параметры контроля качества на большом наборе данных регионально рассеченного контрольного мозга человека для исследований экспрессии всего генома. Дж. Нейрохим . 119 , 275–282 (2011).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Овчаренко, И., Нобрега, М. А., Лутс, Г. Г. и Стаббс, Л. Браузер ECR: инструмент для визуализации и доступа к данным из сравнений геномов нескольких позвоночных. Nucleic Acids Res . 32 , W280 – W286 (2004).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Stoneley, M., Paulin, F. E., Le Quesne, J. P., Chappell, S. A. & Willis, A. E. Нетранслируемая область C-Myc 5 ‘содержит внутренний входной сегмент рибосомы. Онкоген 16 , 423–428 (1998).
CAS PubMed Google ученый
Kraushar, M. L. et al. Определенная во времени трансляция неокортекса и сборка полисом определяются РНК-связывающим белком Hu антигеном R. Proc. Natl Acad. Sci. США 111 , E3815 – E3824 (2014).
CAS PubMed Google ученый
МакГлинси, Н. Дж. И Инголия, Н. Т. Измерение трансляции в масштабе всего транскриптома с помощью профилирования рибосом. Методы 126 , 112–129 (2017).
PubMed PubMed Central Google ученый
Adiconis, X. et al. Сравнительный анализ методов секвенирования РНК для деградированных образцов или образцов с низким входом. Нат. Методы 10 , 623–629 (2013).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Blazquez, L. et al. Комплекс соединений экзонов формирует транскриптом путем подавления рекурсивного сплайсинга. Мол. Ячейка 72 , 496–509.e9 (2018).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Мартин, М. Кутадапт удаляет последовательности адаптеров из считываний высокопроизводительного секвенирования. EMBnet J . 17, , 10 (2011).
Google ученый
Langmead, B. & Salzberg, S. L. Быстрое выравнивание по пробелам и чтению с Bowtie 2. Нат. Методы 9 , 357–359 (2012).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Dobin, A. et al. STAR: сверхбыстрый универсальный выравниватель RNA-seq. Биоинформатика 29 , 15–21 (2013).
CAS Google ученый
Смит Т., Хегер А. и Садбери И. Инструменты UMI: моделирование ошибок секвенирования в уникальных молекулярных идентификаторах для повышения точности количественной оценки. Genome Res . 27 , 491–499 (2017).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Лав М. И., Хубер В. и Андерс С. Умеренная оценка кратного изменения и дисперсии данных РНК-seq с помощью DESeq2. Биология генома . 15 , 550 (2014).
PubMed PubMed Central Google ученый
Молл, П., Анте, М., Зейтц, А. и Реда, Т. Секвенирование 3 ‘мРНК QuantSeq для количественной оценки РНК. Нат. Методы 11 , i – iii (2014).
CAS Google ученый
Куинлан, А. Р. и Холл, И. М. BEDTools: гибкий набор утилит для сравнения геномных характеристик. Биоинформатика 26 , 841–842 (2010).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Wickham, H. Ggplot2: Элегантная графика для анализа данных (Springer, 2009).
Edgar, R.C. MUSCLE: множественное выравнивание последовательностей с высокой точностью и высокой пропускной способностью. Nucleic Acids Res . 32 , 1792–1797 (2004).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Waterhouse, A. M., Procter, J. B., Martin, D. M. A., Clamp, M. & Barton, G. J.Jalview Version 2 — редактор множественного выравнивания последовательностей и инструментальные средства анализа. Биоинформатика 25 , 1189–1191 (2009).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Lin, M. F., Jungreis, I. & Kellis, M. PhyloCSF: метод сравнительной геномики для различения кодирующих и некодирующих белков областей. Биоинформатика 27 , i275 – i282 (2011).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Plessy, C. et al. Связывание промоторов с функциональными транскриптами в небольших образцах с помощью nanoCAGE и CAGEscan. Нат. Методы 7 , 528–534 (2010).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Lizio, M. et al. Пути к атласу экспрессии млекопитающих на уровне промотора FANTOM5. Биология генома . 16 , 22 (2015).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Lorenz, R. et al. Пакет ViennaRNA 2.0. Алгоритмы Мол. Биол . 6 , 26 (2011).
PubMed PubMed Central Google ученый
Ritchie, M. E. et al. limma обеспечивает анализ дифференциальной экспрессии для секвенирования РНК и исследований на микрочипах. Nucleic Acids Res . 43 , e47 (2015).
PubMed PubMed Central Google ученый
Law, C. W., Chen, Y., Shi, W. & Smyth, G. K. voom: Прецизионные веса открывают инструменты анализа линейной модели для подсчета считываний RNA-seq. Биология генома . 15 , Р29 (2014).
PubMed PubMed Central Google ученый
Gu, Z., Eils, R. & Schlesner, M. Сложные тепловые карты выявляют закономерности и корреляции в многомерных геномных данных. Биоинформатика 32 , 2847–2849 (2016).
CAS PubMed Google ученый
Chen, E. Y. et al. Enrichr: интерактивный и совместный инструмент анализа пополнения списка генов HTML5. BMC Bioinformatics 14 , 128 (2013).
PubMed PubMed Central Google ученый
Ван, Дж., Дункан, Д., Ши, З. и Чжан, Б. Веб-сайт GEne SeT AnaLysis Toolkit (WebGestalt): обновление 2013. Nucleic Acids Res . 41 , W77 – W83 (2013).
PubMed PubMed Central Google ученый
Shannon, P. et al. Cytoscape: программная среда для интегрированных моделей сетей биомолекулярного взаимодействия. Genome Res . 13 , 2498–2504 (2003).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Ся, Дж., Беннер, М. Дж. И Хэнкок, Р. Э. У. NetworkAnalyst — интегративные подходы к сетевому анализу и визуальному исследованию межбелкового взаимодействия. Nucleic Acids Res . 42 , W167 – W174 (2014).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Machiela, M. J. & Chanock, S. J. LDlink: веб-приложение для изучения популяционно-специфической структуры гаплотипов и связывания коррелированных аллелей возможных функциональных вариантов. Биоинформатика 31 , 3555–3557 (2015).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Luisier, R. et al. Удержание в интроне и потеря SFPQ в ядре являются молекулярными признаками БАС. Нат. Коммуна . 9 , 2010 (2018).
ADS PubMed PubMed Central Google ученый
Писарев, А.В., Колупаева, В. Г., Юсупов, М. М., Хеллен, К. У. Т., Пестова, Т. В. Рибосомное положение и контакты мРНК в комплексах инициации трансляции эукариот. EMBO J . 27 , 1609–1621 (2008).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Противодействие предложенному дренажу карьера известняка в бассейн Мамонтовой пещеры
Противодействие предлагаемому дренажу карьера известняка в бассейн пещеры Мамонта Размещено: 11 апреля 2007 г.19 февраля 2007 г.
Ms.Эрин Райт, автор разрешений
КПДЭС Филиал
Отдел воды
14 Рейли Роуд
Франкфорт, Кентукки 40601
Re: Public Notice 2007-03
Камень округа Эдмонсон
KPDES № KY0106747
Уважаемая г-жа Райт!
Эти комментарии представлены Kentucky Resources Council, Inc. от имени членов Совета, которые используют и пользуются ресурсами района Мамонтовой пещеры и которые пострадают и пострадают, если будет выдано разрешение KPDES, разрешающее дренаж в шахтах. войти в Turnhole Springs.
Введение
Добыча известняка создает ряд потенциальных экологических проблем, которые необходимо решить в процессе выдачи разрешений, чтобы достичь установленной законом цели защиты населения и окружающей среды. В неоспоримых показаниях Джона Моргана в суде по делу Olive Hill Investment Corporation, которое стало причиной того, что агентство в 1995 году пересмотрело нормативные положения, не связанные с углем, последствия добычи известняка описывались следующим образом:
Горнодобывающая промышленность оказывает различное воздействие в зависимости от того, где вы находитесь, от первой разведки до добычи и рекультивации.Основные области, на которые вы собираетесь повлиять за пределами участка, — это режим поверхностных вод, режим грунтовых вод и, наконец, аспекты шума, пыли, вибрации. В частности, возвращаясь к проблемам с водой, на поверхностные воды можно повлиять, изменив характеристики потока от участка, так что ваши скорости потока во время штормов могут быть разными.
Вы также можете получить разницу в физических характеристиках воды, таких как взвешенные твердые частицы. На химическое качество воды также может повлиять контакт с металлами или другими токсичными материалами в процессе добычи.Горные работы могут повлиять на режим подземных вод разными способами. И во-первых, если вы войдете в карьер, который пересечет водоносный горизонт, тогда у вас может возникнуть эффект просадки, в результате чего карьера сама по себе является стоком для местных грунтовых вод. Вы также можете воздействовать на грунтовые воды. Пути потока можно изменить, чтобы у вас был эквивалент низкопотенциального участка, на котором они добывают, поэтому вода может иметь тенденцию течь к нему и, следовательно, может изменить структуру грунтовых вод. У вас также есть проблема в том, что если на участке был засыпан какой-либо токсичный материал, то он мог попасть в грунтовые воды и мигрировать в нисходящем направлении грунтовых вод.Итак, у вас есть физические и химические изменения в режиме грунтовых вод.
Проблемы с шумом, пылью и вибрацией, любая добыча полезных ископаемых создает шум — он свойственен ей — из-за дублирующих сигналов тревоги, воздушных взрывов от взрывных работ. И это можно контролировать, но это будет иметь внешний эффект. У вас также есть проблема с пылью. Добыча, опять же, по своей природе является нарушением горных пород; и, следовательно, вы создадите некоторое количество пыли как на дорогах, так и во время дробления и взрывных работ.И сама вибрация, посредством любого взрыва, вы создадите вибрацию, которая может передаваться через прилегающие [горные] пласты, следовательно, будет иметь внешний эффект. (Стенограмма слушания, стр.91-3).
На этом фоне у KRC есть следующие особые опасения относительно предлагаемой эксплуатации карьера:
1. Бассейн подземных вод источника Турнхол — это хорошо задокументированный бассейн протяженностью около 244 км, который является крупнейшим источником стока в гидрологической системе Мамонтовой пещеры.Трассировка красителей в пещерах и водосборные водоразделы в карстовом водоносном горизонте Мамонтовой пещеры, Кентукки, Геологическая служба США, http://water.usgs.gov/ogw/karst/kigconference/jm_incvedye.htm. Дренаж шахт, содержащий повышенные уровни взвешенных и растворенных твердых частиц, может отрицательно повлиять на качество воды в пещерной системе, поскольку вторичный карстовый поток уязвим для такого загрязнения, и такое загрязнение очень мало ослабляется из-за отсутствия фильтрации внутри. система. Повышение мутности может отрицательно повлиять на субстрат, на котором обитают пещерные креветки и другие водные виды в пещерной системе.Среди соображений, которые необходимо оценить при рассмотрении этого разрешения, следует отметить воздействие на карстовые водоносные горизонты, на которые может быть физически оказано воздействие разработка карьеров и связанные с ними взрывные работы, а также химическое загрязнение или загрязнение отложениями; воздействие на охраняемые государством и охраняемые государством виды; влияние на качество системы, сложная гидрогеология которой делает ее уязвимой для загрязнения и разрушения из-за добычи полезных ископаемых в такой непосредственной близости; и воздействие на эстетические и биологические ценности пещерной системы.
Если дренаж из предполагаемого карьера будет содержать повышенные уровни загрязнителей, заявитель должен продемонстрировать, что не будет отрицательного воздействия на какие-либо охраняемые государством виды в пещерной системе.Соответствующее отслеживание окраски участка при всех сезонных и проточных условиях, чтобы установить степень и характер гидрологической связи с системой Мамонтовой пещеры, и соответствующее моделирование как для химических (растворенные твердые вещества), так и для физических (взвешенные и осаждаемые твердые вещества). ) необходимо для демонстрации отсутствия воздействия на эти виды и качество воды в пещерной системе.
2. Учитывая высокую степень вероятности наличия гидрологической связи между предлагаемым участком карьера и гидрологической системой Мамонтовой пещеры, следует проконсультироваться со Службой национальных парков, а также с Государственным управлением по охране памятников старины, чтобы убедиться, что выдача разрешение не повлияет отрицательно на собственность, внесенную в Национальный реестр исторических мест.
Кроме того, присутствие охраняемых на федеральном уровне видов в пещерной системе требует консультации со Службой охраны рыболовства и дикой природы США, чтобы гарантировать, что не будет вылова охраняемых на федеральном уровне видов путем выдачи разрешения, разрешающего повышенные уровни твердых веществ в быть выписанным.
Как минимум, агентство должно отложить дальнейшую обработку заявки до рассмотрения и утверждения Отделом водных ресурсов базового биологического исследования и до тех пор, пока FWS и KDFWR США не сообщат об отсутствии неблагоприятного воздействия.
Заранее благодарим вас за рассмотрение этих проблем. KRC также рекомендует, чтобы выдача разрешения KPDES согласовывалась с Неуглевым отделом DMRE, чтобы гарантировать отсутствие неблагоприятного воздействия на окружающую среду от предлагаемой операции, как это требуется в соответствии с главой 350 KRS.
Cordially,
Том Фитцджеральд
Директор
Руководство по корпоративному сотрудничеству — Управление по борьбе с серьезным мошенничеством
Этот документ носит ознакомительный характер.Он помогает в оценке сотрудничества со стороны хозяйствующих субъектов (далее именуемых «организациями»). Решения в каждом случае будут основываться на конкретных фактах и обстоятельствах этого дела. [1]
Сотрудничество организаций приносит пользу обществу и продвигает интересы правосудия, позволяя Управлению по борьбе с серьезным мошенничеством («SFO») более быстро и надежно разбираться в фактах, получать допустимые доказательства и продвигать расследование до стадии, когда прокурор может применять закон к фактам.
Сотрудничество будет уместным соображением в решениях SFO о предъявлении обвинений в той мере, в какой это указано в Руководстве по корпоративному преследованию и Кодексе практики соглашений об отложенном судебном преследовании . Согласно Руководству по корпоративному преследованию, это фактор общественных интересов, препятствующий судебному преследованию, когда руководство применяет «действительно проактивный подход» после того, как узнает о правонарушении. Сотрудничество может быть важной частью такого действительно проактивного подхода ( DPA Code 2.8.2 (i)).
Сотрудничество означает оказание помощи SFO, которая выходит за рамки того, что требуется по закону. Он включает: выявление подозреваемых в совершении правонарушений и преступного поведения вместе с ответственными лицами, независимо от их трудового стажа или должности в организации; сообщить об этом в SFO в разумные сроки после выявления подозрений; и сохранение имеющихся доказательств и их своевременное предоставление в доказательно обоснованном формате.
Подлинное сотрудничество несовместимо с: защитой конкретных лиц или необоснованным обвинением других; привлечение внимания субъектов и создание опасности фальсификации доказательств или свидетельских показаний; молчание по избранным вопросам; тактические задержки или информационные перегрузки.
Важно, чтобы организации, стремящиеся к сотрудничеству, понимали, что сотрудничество — даже полное, надежное сотрудничество — не гарантирует какого-либо конкретного результата. Сам характер сотрудничества означает, что не существует контрольного списка, который мог бы охватить все случаи. В каждом случае будут свои факты. Обсуждая сотрудничество с организацией, SFO разъясняет, что характер и масштабы сотрудничества организации являются одним из многих факторов, которые SFO будет принимать во внимание при принятии решения о соответствующем решении по своему расследованию.SFO сохранит полный и независимый контроль над своим расследованием.
Многие юрисконсульты хорошо понимают, какой тип поведения представляет собой истинное сотрудничество. Это отразится на характере и тоне взаимодействия между действительно сотрудничающей организацией, ее юрисконсультами и SFO. Тем не менее, некоторые показатели передовой практики перечислены ниже, как и примеры шагов, которые SFO может попросить предпринять организацию. Это не полный список; некоторые элементы будут неприменимы (или нежелательны) в определенных случаях, и это не предназначено и не создает юридически закрепленных прав, ожиданий или обязательств:
Консервация и обеспечение материала
1.Хорошая общая практика
- Сохраняйте материалы, относящиеся как к цифровым, так и к бумажным копиям, используя метод, предотвращающий риск разрушения или повреждения документа.
- Обеспечьте сохранность цифровой целостности по мере получения материала, особенно цифрового материала.
- Получать и предоставлять материалы в кратчайшие сроки по запросу, чтобы отвечать на запросы SFO и соблюдать согласованные сроки.
- Предоставьте список соответствующих хранителей документов и местонахождение (цифровое или физическое) документов.
- Предоставляйте полезный структурированный материал, например:
- Компиляции выбранных документов (включая бумажные копии, электронные сообщения, записи, показывающие движение денежных средств) по запросу SFO;
- Особо актуальные материалы, отсортированные, например, по отдельным или конкретным вопросам;
- Соответствующие материалы, собранные в ходе внутреннего расследования;
- Основная справочная информация об организации, включая органограммы; списки, названия должностей, а также контактную и личную информацию соответствующих лиц; и какие категории данных существуют (например,грамм. электронная почта, аудио, чаты).
- Поставлять материал на прокатной основе согласованным способом.
- Незамедлительно проинформируйте SFO о подозрениях и причинах потери, удаления или уничтожения данных.
- Укажите соответствующие материалы, которыми владеют третьи стороны. SFO может попросить организацию облегчить производство сторонних материалов.
- Предоставьте соответствующие материалы, которые хранятся за границей, если они находятся во владении или под контролем организации.
- Незамедлительно предоставить список документов, в отношении которых отказано на основании привилегии, включая основание для утверждения привилегии.
- Если организация решит отстаивать юридические привилегии в отношении соответствующих материалов (таких как первые отчеты, собеседования во время внутреннего расследования или другие документы), SFO может оспорить это утверждение, если сочтет это необходимым или целесообразным.
- Содействовать в выявлении материалов, которые можно было бы разумно считать способными помочь любому обвиняемому или потенциальному обвиняемому или подорвать доводы обвинения.
2. Цифровые доказательства и устройства
- Предоставлять цифровые материалы в формате, который запрашивает SFO, то есть в формате, готовом для приема и просмотра на платформах обзора документов SFO. SFO может попросить организацию предоставить графики соответствующих документов, которые она создает, и подробные сведения об условиях поиска, «исходных наборах» или других методах поиска, применяемых для извлечения документов.
- Создайте и ведите контрольный журнал приобретения цифровых материалов и устройств и обращения с ними, а также укажите человека, который должен предоставить свидетельское заявление о непрерывности.
- Будьте внимательны к устаревшим технологиям или заказным системам и сохраняйте средства чтения цифровых файлов в течение всего срока расследования, любого судебного преследования и апелляции.
- Предупредить SFO о соответствующих цифровых материалах, к которым организация не может получить доступ, например, о соответствующих частных учетных записях электронной почты, приложениях для обмена сообщениями или социальных сетях, которые были обнаружены в ходе внутреннего расследования.
- Сохранять и предоставлять пароли, ключи восстановления, ключи дешифрования и т.п. в отношении цифровых устройств.
3. Печатная копия или вещественное доказательство
Создание и ведение контрольного журнала приобретения и обработки бумажных и физических материалов и определение лица, которое будет предоставлять свидетельские показания, касающиеся непрерывности.
4. Финансовая отчетность и анализ
- Предоставьте записи, которые показывают соответствующие денежные потоки.
- Предоставляйте соответствующие финансовые документы организации в структурированном виде, включая банковские записи, счета-фактуры, денежные переводы, контракты, бухгалтерские записи и другие подобные документы.
- Предупредить SFO о соответствующих финансовых материалах, к которым у организации нет доступа, например, о банковских счетах, на которые поступают деньги от организации.
- Сделать бухгалтеров и / или другой соответствующий персонал (внутренний и / или внешний) доступным для составления и общения с финансовыми записями и объяснения того, что они из себя представляют и что они показывают о денежных потоках.
- Создайте и ведите контрольный журнал приобретения финансовых материалов и обращения с ними, а также определите лицо, которое будет представлять доказательства и обеспечивать непрерывность.
- Предоставьте финансовую информацию и расчеты, относящиеся к прибыли, изъятию, расчету финансовых штрафов и платежеспособности.
5. Отрасль и справочная информация
- Предоставление отраслевых знаний, контекста и общепринятых практик.
- Определите потенциальные средства защиты, относящиеся к рассматриваемому рынку или отрасли. Предоставьте информацию о других участниках соответствующего рынка.
- Сообщите SFO о любых других государственных учреждениях (национальных или иностранных, правоохранительных или регулирующих), через которые с организацией связывались или которым она сообщала.
6. Физические лица
- Во избежание предвзятого отношения к расследованию, своевременно проконсультируйтесь с SFO перед опросом потенциальных свидетелей или подозреваемых, принятием кадровых / кадровых мер или других явных действий.
- Определите потенциальных свидетелей, включая третьих лиц.
- Воздержитесь от искажения воспоминаний потенциального свидетеля, например, поделившись или предложив прокомментировать рассказ другого человека или показывая документы свидетелей, которые они ранее не видели.
- Обеспечьте доступность сотрудников и (где возможно) агентов для собеседований в SFO, включая организацию их возвращения в Великобританию в случае необходимости.
- При необходимости укажите последние известные контактные данные бывших сотрудников, агентов и консультантов.
Учетные записи свидетелей и отказ от привилегии
При проведении внутренних расследований некоторые организации получают счета от частных лиц. С 2014 года Кодекс практики соглашений об отсроченном судебном преследовании предусматривает (в пункте 2.8.2 (i):
«Сотрудничество: можно придать большое значение действительно проактивному подходу. . . . Сотрудничество будет включать установление соответствующих свидетелей, раскрытие их счетов и документов, показанных им. По возможности, это будет включать в себя доступность свидетелей для допроса по запросу. Это также будет включать предоставление отчета о любом внутреннем расследовании, включая первичные документы ».
Организации, стремящиеся к сотрудничеству путем предоставления свидетельских показаний, должны дополнительно предоставить любые записи, заметки и / или стенограммы допроса и указать свидетеля, компетентного говорить по содержанию каждого допроса.
Когда организация решает не отказываться от привилегии, SFO, тем не менее, имеет обязательства перед потенциальными отдельными ответчиками в отношении материалов, подлежащих раскрытию. [2]
Необходимо надлежащим образом установить наличие действительного требования привилегий. [3]
В ходе расследования, если организация заявляет о своей привилегии, ожидается, что она предоставит подтверждение от независимого юриста о том, что рассматриваемый материал является конфиденциальным.
Если от привилегии не отказываются и судебное разбирательство продолжается, в соответствующих случаях, SFO будет подавать заявление о вызове свидетеля в соответствии с разделом 2 Закона 1965 года об уголовном судопроизводстве (явка свидетелей).[4]
Организация, которая не отказывается от привилегии и не предоставляет свидетельские показания, не достигает соответствующего фактора против судебного преследования, который содержится в кодексе DPA (см. Выше), но не будет подвергаться наказанию со стороны SFO. [5]
Другое
Могут возникнуть обстоятельства, даже когда организация сотрудничает, когда SFO будет необходимо или уместно использовать силу принуждения для получения соответствующих материалов.
Соблюдение обязательного процесса само по себе не означает сотрудничества.И наоборот, использование принуждения не обязательно означает, что SFO считает организацию не сотрудничающей.
[1] «Организации» включают юридические лица, такие как компании с ограниченной ответственностью, товарищества с ограниченной ответственностью и т. Д.
[2] Что касается показаний конфиденциальных свидетелей, Палата лордов постановила, что важность юридической тайны перевешивает просьбу ответчика о предварительных свидетельских показаниях: R v Derby Magistrates Court ex parte B [1996] 1 AC 487.
[3] См. R (о применении AL) против SFO [2018] EWHC 856 (Admin).
[4] См. Совет в R (по применению AL) против SFO [2018] EWHC 856 (Admin) (дело XYZ).
[5] Апелляционный суд не исключил рассмотрение судом последствий отказа организации от права на показания свидетелей, поскольку он определил
показывает, соответствует ли предлагаемый DPA интересам правосудия: SFO v ENRC [2018] EWCA Civ 2006 at [117].
ID163 Версия OGW 1, опубликована в августе 2019 г. © Crown Copyright, 2020.
Эта информация находится под лицензией Open Government License v3.0. Чтобы просмотреть эту лицензию, посетите http://www.nationalarchives.gov.uk/doc/open-government-licence/version/3/ или напишите в отдел информационной политики, Национальный архив, Кью, Ричмонд, Суррей, TW9 4DU .
Любые запросы относительно данной публикации следует направлять в Управление по борьбе с серьезным мошенничеством, 2-4 Cockspur Street SW1Y 5BS, электронная почта: [email protected]
Посттранскрипционное подавление экспрессии генов в эмбрионах Xenopus малыми интерферирующими РНК
Специфическое ингибирование экспрессии гетерологичных генов в эмбрионах
Xenopus с помощью siRNAПредыдущая работа на эмбрионах рыбок данио и эмбрионов Xenopus показала, что 7,20–27).С другой стороны, дцРНК длиной> 30 п.н. также известны тем, что вызывают неспецифические по отношению к последовательности эффекты, вероятно, опосредованные активацией 2 ‘, 5’-аденозинсинтетазы и дцРНК-зависимой протеинкиназы PKR (31–33). Т.о., длинные dsRNAs вызывают неспецифическую деградацию всех РНК (28,29), приводя к различным грубым дефектам у инъецированных dsRNA рыбок данио и эмбрионов Xenopus (27-29). Неспецифические эффекты длинной дцРНК препятствуют ее дальнейшему использованию для функциональных исследований на модельных позвоночных, таких как рыбки данио и Xenopus , а также в дифференцированных соматических тканях у мышей.Недавние открытия, что siRNAs из 21–23 нуклеотидов могут опосредовать RNAi в культивируемых клетках млекопитающих, не запуская неспецифический путь, ведущий к деградации мРНК и ингибированию синтеза белка (34–36), проложили путь для более широкого использования siRNAs. Однако еще предстоит выяснить, являются ли siRNA столь же эффективными у живых позвоночных, как и в культивируемых клетках позвоночных. В качестве первого шага к применению миРНК в Xenopus мы сначала исследовали, могут ли миРНК подавлять экспрессию экзогенно введенного репортерного гена во время раннего эмбриогенеза.
Мы микроинъектировали pCS2-Luc, вектор экспрессии Xenopus для GL3-версии люциферазы светлячка, в двухклеточные эмбрионы Xenopus на стадии и оценивали временную экспрессию гена люциферазы на разных стадиях развития. Ранние эмбрионы Xenopus подвергаются синхронному делению вплоть до 12-го клеточного цикла. Циклы расщепления 2–12 быстрые и состоят только из чередующихся фаз S и M. Затем цикл деления замедляется и становится асинхронным, начинается зиготическая транскрипция и устанавливаются фазы разрыва (G 1 и G 2 ).Это изменение, происходящее на стадиях 8 и 9, известно как переход средней бластулы (MBT) (37). Как и ожидалось, репортерный ген люциферазы не экспрессировался до MBT, потому что эмбрионы были транскрипционно молчащими, но пост-MBT экспрессия люциферазы была устойчивой и устойчивой с более чем 20-кратным увеличением от стадии 9,5 до стадии 22 (рис. A). . Чтобы изучить эффекты миРНК, мы совместно вводили pCS2-Luc отдельно с одним буфером (без миРНК), с миРНК, нацеленной на версию люциферазы GL3 (миРНК GL3), с миРНК, разработанной против люциферазы GL2 (миРНК GL2), и с имитацией миРНК. (Инжир.Б). Примечательно, что версии гена люциферазы GL3 и GL2 имеют 95% идентичности в последовательности ДНК. Фактически, только 3 нуклеотида из 21 нуклеотидов различаются между миРНК GL3 и GL2. Мнимая миРНК против нерелевантной кДНК человека. Мы наблюдали, что совместная инъекция миРНК GL3 приводила к> 60% ингибированию экспрессии люциферазы GL3 (рис. B). В отличие от этого, активность люциферазы, полученная из эмбрионов, совместно инъецированных с ложной siRNA, не изменилась заметно по сравнению с уровнем у эмбрионов, которые не получали siRNA.Тот факт, что фиктивная миРНК не может ингибировать экспрессию люциферазы, подтверждает специфичность действия миРНК. Интересно, что миРНК GL2, которая идентична миРНК GL3, за исключением 3 нуклеотидов, также ингибировала экспрессию гомологичной люциферазы GL3, хотя ингибирование люциферазы GL3 миРНК GL2 (~ 25% ингибирования) было значительно слабее, чем миРНК GL3 (> 60% ингибирование). В тех же условиях миРНК GL2 может специфически ингибировать экспрессию люциферазы GL2 (данные не показаны). Примечательно, что сходные паттерны ингибирования миРНК GL2 и GL3 наблюдались на обеих стадиях 16 и 20, предполагая, что миРНК действует постоянно, по крайней мере, во время нейруляции.
siRNA подавление экспрессии гетерологичных генов у эмбрионов Xenopus . ( A ) Временная экспрессия гена люциферазы во время раннего эмбриогенеза. Плазмиду pCS2-Luc (150 пг в 5 нл), вектор экспрессии для версии люциферазы GL3, микроинъектировали в оба бластомера эмбрионов на двухклеточной стадии. Введенные эмбрионы собирали на разных стадиях, лизировали и анализировали на люциферазную активность. Все значения представляют собой средние значения для четырех групп эмбрионов, а полосы ошибок указывают стандартное отклонение от среднего.Эксперименты были повторены дважды с аналогичными результатами. ( B ) Ген-специфическое ингибирование экспрессии люциферазы с помощью siRNA. Плазмиду экспрессии люциферазы pCS2-Luc (150 пг) и указанные миРНК (20 мкМ) совместно вводили в эмбрионы, как в (А). Объем впрыска составлял 5 нл. Эмбрионы собирали на стадиях 16 и 20. Средняя активность люциферазы, полученная из контрольных эмбрионов без миРНК, была принята за 100%. МиРНК GL3, миРНК, нацеленная на люциферазу GL3; МиРНК GL2, миРНК, нацеленная на версию люциферазы GL2; фиктивная миРНК, миРНК, нацеленная на нерелевантные человеческие, но не последовательности Xenopus .Аналогичные результаты были получены при использовании 10 мкМ миРНК (данные не показаны).
Мы также определили концентрационную зависимость siRNA-опосредованного ингибирования экспрессии гена. В отличие от эффекта миРНК у нематод, где для индукции репрессии достаточно всего двух молекул на клетку (4), для значительного ингибирования экспрессии гена люциферазы у эмбрионов Xenopus требовалось не менее 5 мкМ миРНК GL3 (рис. . А). Дозозависимый эффект siRNA в Xenopus в целом согласуется с предыдущими данными о RNAi в ооцитах мышей (26).
Дозозависимое и специфическое ингибирование экспрессии генов с помощью siRNA. ( A ) Зависимое от концентрации действие миРНК. PCS2-Luc (150 пг) вводили совместно с указанными концентрациями миРНК GL3. Объем впрыска составлял 5 нл. ( B ) Типичные примеры эмбрионов без инъекций и эмбрионов с инъекцией миРНК GL3 на стадиях 8,5, 16 и 20. siРНК (20 мкМ в 5 нл) вводили на стадии 2 клеток. Сравнивали не менее 40 эмбрионов.
Мы отметили, что миРНК GL2 не подавляет экспрессию люциферазы GL3 в четырех линиях культивируемых клеток млекопитающих (34).Мы не до конца понимаем, почему миРНК GL2 по-разному ведет себя в этих двух системах. Тем не менее, значительно более слабое ингибирование экспрессии люциферазы GL3, опосредованное миРНК GL2, у эмбрионов Xenopus подразумевает, что ингибирование миРНК строго зависит от последовательности, с 15% -ным расхождением в последовательности, что существенно различается. Это согласуется с результатами, ранее показанными в других системах (19,40–42).
siRNA ингибирование экспрессии генов у эмбрионов Xenopus (рис.B), хотя и существенный и значительный, но не такой полный, как в клетках нематод и насекомых (4–6). Эти данные согласуются с опубликованными результатами, полученными на культивируемых клетках млекопитающих (34–36). Наши находки подтверждают возможность того, что siRNAs могут действовать через разные механизмы у позвоночных.
Специфичность действия остается серьезной проблемой для опосредованного siRNA ингибирования экспрессии генов у эмбрионов Xenopus . Предыдущие исследования нескольких групп документально подтвердили индукцию неспецифических грубых дефектов у эмбрионов рыбок данио и Xenopus с помощью длинной dsRNA (25,27–29).В частности, было продемонстрировано, что эмбрионы, инъецированные дцРНК, направленные против lacZ или зеленого флуоресцентного белка, также обнаруживают серьезные неспецифические дефекты уже через 12 и 24 часа после оплодотворения (25,28,29). Имея это в виду, мы сравнили морфологию неинъектированных и инъецированных миРНК GL3 эмбрионов Xenopus в течение всего процесса эмбриогенеза. Мы не смогли найти никаких дефектов или отклонений у введенных эмбрионов. Мы также не смогли обнаружить различий между группами без инъекций и инъекциями на любой стадии развития (репрезентативные эмбрионы показаны на рис.Б). В частности, мы провели полуколичественную ОТ-ПЦР для сравнения относительных количеств четырех транскриптов мРНК (для циклина B1, циклина B2, CDC20 / Fizzy / p55CDC и CDh2 / Fizzy-related / HCT1) в неинъектированных и инъецированных эмбрионах, но нам не удалось обнаружить никаких изменений (данные не показаны). Таким образом, очень маловероятно, что миРНК GL3 может вызывать неспецифическую деградацию других мРНК. Эти результаты дополнительно подтверждают специфичность ингибирования экспрессии генов миРНК.
Специфическое ингибирование экспрессии эндогенного гена в
эмбрионах Xenopus с помощью siRNAВыше мы показали, что siRNA могут специфически подавлять экспрессию экзогенно введенного репортерного гена.Подавление происходит после MBT и сохраняется, по крайней мере, до стадии 20. Затем мы запросили ингибирование siRNA эндогенных генов. Мы сконструировали две миРНК против Xenopus циклинов B1 и B2. Хорошо известно, что циклины колеблются во время ранних клеточных циклов эмбриона (43). В частности, белки циклин B1 и B2 разрушаются в митозе посредством убиквитин-зависимого протеолиза, катализируемого комплексом, стимулирующим анафазу, и повторно синтезируются из долговременной материнской мРНК в следующей S-фазе (43).Когда мы микроинъектировали миРНК против циклина B1 (миРНК B1) в эмбрионы на 2-клеточной стадии, стабильное количество белка циклина B1 резко упало на 32-клеточной стадии после двух последовательных циклов деления (сравните фиг. B с A). В качестве контроля уровни α-тубулина и циклина B2 не снижались у эмбрионов, инъецированных миРНК B1. Напротив, количество циклина B1 в эмбрионах, инъецированных siRNA против циклина B2 (B2 siRNA), которое, как было показано, специфически ингибирует экспрессию циклина B2 (рис.C), было сопоставимо с таковым у эмбрионов с имитацией инъекции без siRNA (сравните фиг. C с A), что позволяет предположить, что ингибирование, опосредованное siRNA, имеет специфичность последовательности. Снижение количества циклинов B1 и B2 вряд ли может быть связано с колебаниями продукции циклина, потому что циклы ранних эмбриональных клеток в Xenopus синхронизированы (37), а контрольные имитационно инъецированные эмбрионы, собранные в одни и те же моменты времени, экспрессировали циклин B1 и циклин B2. обильно (рис. А).
siRNA подавление экспрессии эндогенных генов у эмбрионов Xenopus .Оба бластомера эмбрионов на двухклеточной стадии имитировали инъекции ( A ), инъекции миРНК (20 мкМ в 5 нл), нацеленные на Xenopus cyclin B1 ( B ), или инъекцию миРНК против циклина B2 ( C ). . Вестерн-блоттинг (слева) и ОТ-ПЦР (справа) проводили с использованием указанных антител и праймеров. Введение 40 мкМ миРНК дало аналогичные результаты (данные не показаны). МиРНК B1, миРНК, нацеленная на циклин B1; МиРНК B2, миРНК, нацеленная на циклин B2; cycB1, циклин B1; cycB2, циклин B2; ванна, α-тубулин; h5, гистон h5.
Поскольку эмбрионов Xenopus транскрипционно молчаливы до MBT (37), ингибирование экспрессии циклина B1 с помощью миРНК B1, вероятно, происходит посттранскрипционно за счет инактивации мРНК. Чтобы пролить свет на это, мы провели полуколичественную ОТ-ПЦР для проверки транскрипта циклина B1. Результаты этого анализа в целом соответствовали данным вестерн-блоттинга (рис.). Опять же, инъекция миРНК B1 специфически уменьшала мРНК циклина B1 в 32-клеточных эмбрионах, но не транскрипты гистона h5 или циклина B2 (рис.Б). Количество мРНК циклина B1 в эмбрионах с имитацией инъекции (фиг. A) и B2 siRNA (фиг. C) было постоянным. Мы также отметили, что инъекция миРНК B1 или B2 нарушила синхронизацию клеточного деления за пределами стадии 32 клеток (данные не показаны), поэтому трудно постоянно сравнивать имитированные эмбрионы. Тем не менее siRNA эффективна для специфического ингибирования эндогенного гена на ранних клеточных циклах до начала MBT во время эмбриогенеза Xenopus . Наши данные согласуются с моделью, согласно которой миРНК индуцирует ген-специфическую деградацию транскрипта мРНК.
Посттранскрипционное подавление экспрессии генов в
эмбрионах Xenopus с помощью siRNAРНКи происходит как транскрипционно, так и посттранскрипционно в растениях (8,15,44). Однако механизмы подавления siRNA экспрессии генов в эмбрионах и клетках позвоночных остаются неясными. Полученные нами данные о том, что инъекция миРНК в эмбрионов Xenopus привела к ген-специфическому снижению транскрипции мРНК в транскрипционно молчащей системе, побуждают нас проверить более прямое посттранскрипционное подавление экспрессии генов с помощью миРНК.С этой целью мы оценили влияние миРНК на активность in vitro транскрибируемой репортерной РНК , введенной в эмбрионов Xenopus .
Сначала мы микроинъектировали in vitro РНК, кодирующую люциферазу GL3 (мРНК Luc), в эмбрионы на двухклеточной стадии и определили временной паттерн экспрессии люциферазы во время эмбриогенеза (рис. A). Мы отметили, что активность люциферазы была высокой на стадиях 9 и 18. Затем мы приступили к совместной инъекции миРНК с репортерной РНК, чтобы определить, действует ли миРНК на транскрипционном или посттранскрипционном уровне.Мы предположили, что миРНК должна подавлять активность репортерной РНК и репортерной ДНК в одинаковой степени, если она действует непосредственно на РНК-мишень исключительно на посттранскрипционной стадии. SiRNA не должна влиять на активность репортерной РНК, если ее действие является исключительно транскрипционным. Наконец, будет наблюдаться частичный ингибирующий эффект, если миРНК действует как транскрипционно, так и посттранскрипционно.
Посттранскрипционное подавление экспрессии генов у эмбрионов Xenopus с помощью миРНК и длинной дцРНК.( A ) Временная экспрессия РНК, кодирующей люциферазу, во время раннего эмбриогенеза. In vitro транскрибированная РНК, кодирующая люциферазу GL3 (мРНК Luc, 2 нг), была микроинъектирована в один бластомер эмбрионов на двухклеточной стадии. Введенные эмбрионы собирали на разных стадиях, лизировали и анализировали на люциферазную активность. ( B ) Ген-специфическое ингибирование экспрессии люциферазы миРНК и длинной дцРНК. РНК, кодирующая люциферазу (мРНК Luc, 2 нг) и указанные миРНК (20 мкМ) или дцРНК (0.2 мкг / мкл) микроинъектировали в эмбрионы, как в (А). Объем впрыска составлял 5 нл. Эмбрионы собирали на стадиях 9 и 18. Средняя активность люциферазы, полученная из контрольных эмбрионов без миРНК или дцРНК, была принята за 100%. МиРНК GL3, миРНК, нацеленная на люциферазу GL3; МиРНК GL2, миРНК, нацеленная на версию люциферазы GL2; фиктивная миРНК, миРНК, нацеленная на нерелевантные человеческие, но не последовательности Xenopus ; ДцРНК GL3, дцРНК 1,7 т.п.н., соответствующая полноразмерным последовательностям, кодирующим люциферазу GL3; ложная дцРНК, 1 т.п.н. дцРНК, соответствующая нерелевантному гену.Все значения представляют собой средние значения для четырех групп эмбрионов, а полосы ошибок указывают стандартное отклонение от среднего. Эксперименты были повторены дважды с аналогичными результатами.
Действительно, мы наблюдали такую же степень ингибирующего действия siRNA на репортерную РНК (т.е. мРНК Luc; рис. B) по сравнению с ее ингибированием репортерной ДНК (т.е. pCS2-Luc; рис. B). Таким образом, на обеих стадиях 9 и 18 миРНК GL3 обеспечивала 50-70% ингибирование активности люциферазы, приписываемой мРНК Luc. Примечательно, что фенотипы, индуцированные миРНК GL2 и ложной миРНК в эксперименте с репортерной РНК (рис.B) также похожи на фенотипы, индуцированные в экспериментах с репортерной ДНК (рис. B). Следовательно, хотя мы не можем полностью исключить возможность подавления транскрипции с помощью миРНК, наши данные подтверждают посттранскрипционную интерференцию как основной механизм ингибирования экспрессии генов миРНК.
Мы также наблюдали, что длинная дцРНК, нацеленная на люциферазу GL3 (дцРНК GL3), может специфически ингибировать активность репортерной РНК на обеих стадиях 9 и 18 (рис. B). Тормозящий эффект этого 1.7 т.п.н. дцРНК GL3 сопоставима с дцРНК, опосредованной миРНК GL3. В этом случае ложная дцРНК размером 1,0 т.п.н. не вызывала неспецифического ингибирования активности репортерной РНК. Таким образом, длинные дцРНК способны опосредовать специфическое подавление экспрессии гомологичных генов у эмбрионов Xenopus , по крайней мере, при определенных обстоятельствах. Эти данные совместимы с недавними документами о специфических РНКи в некоторых культивируемых клетках млекопитающих (23,24,26). Однако мы заметили, что неспецифические грубые дефекты и аномалии были обнаружены со значительно более высокой частотой у эмбрионов Xenopus , инъецированных длинными дцРНК, чем у неинъектированных или инъецированных миРНК (данные не показаны).Дальнейшие исследования необходимы для полного документирования фенотипов, индуцированных длинными дцРНК у Xenopus .